ЛЕЙКОЦИТАРНЫЕ ТЕСТЫ

ЛЕЙКОЦИТАРНЫЕ ТЕСТЫ — совокупность реакций лейкоцитов крови, используемых для изучения специфической реактивности организма in vivo и in vitro. Л. т. in vivo, так же как эозинофильный тест (см.), используются редко, Л. т. in vitro широко применяются при аллергических (бронхиальная астма, поллинозы и др.), инфекционных (туберкулез, Токсоплазмоз, дизентерия и др.), аутоиммунных заболеваниях (системная красная волчанка, ревматизм и др.), при лекарственной непереносимости и т. п.

Л. т. как методам диагностики, получившим широкое применение в 60 — 70-х гг. 20 в., предшествовали работы Холста [(Р. М. Holst), 1922], А. А. Максимова (1924), А. Д. Тимофеевского и С. В. Беневоленской (1925), изучавших свойства лимфоцитов.

Л. т. in vitro делят на две группы: 1) реакции с Бластотрансформация лимфоцитов); применяются как иммунол, тесты при изучении инф. и иммунол. процессов; 2) реакции с гранулоцитами крови для диагностики аллергических реакций замедленного и немедленного типов. Достоинствами Л. т. являются высокая иммунол. активность лейкоцитов, неоднозначность ответов при контакте с антигеном в зависимости от типа сенсибилизации, доступность получения клеток из периферической крови. Противопоказания для Л. т. отсутствуют.

Тест задержки миграции лейкоцитов крови используют в двух модификациях: миграция клеток из капиллярных стеклянных трубок и в агарозном геле. Реакция основана на способности сенсибилизированных к определенному антигену лимфоцитов вступать с ним в реакцию, в результате к-рой в инкубационную среду выделяется растворимое вещество (медиатор), ингибирующее миграцию лейкоцитов (см. Торможение миграции макрофагов). При этом кровь получают от пациента из вены. Выделение и отмывание взвеси лейкоцитов производят при t° 1—4°, а центрифугирование — при низких оборотах. Задержка миграции лейкоцитов наступает в первые 10 мин. и при высоких концентрациях антигена.

К Л. т. относят реакции, с помощью которых оценивают цитотоксический эффект, возникающий в результате взаимодействия сенсибилизированных лимфоцитов с клетками-мишенями. Цитотоксическая реакция опосредуется растворимым медиатором (лимфотоксином). Количественно его цитотоксическое действие оценивается по числу оставшихся жизнеспособными клеток, регистрацией радиоактивных меток, поступающих в инкубационную среду после гибели клеток или поступающих в клетки из среды, по количеству бляшек (зон разрушения) в монослое. Повреждающее воздействие лимфоцитов на клетки-мишени наблюдается и после обработки лимфоцитов комплексом антиген— антитело, интерфероном и нек-рыми другими препаратами.

Для иммунол, исследований применяют так наз. тест розеткообразования, суть к-рого состоит в присоединении к поверхности лимфоцита 3—5 чужеродных эритроцитов или аутоэритроцитов (спонтанное розеткообразование). При помощи этого теста изучают различия в свойствах Т- и B-лимфоцитов, их рецепторный аппарат, механизм воздействия ферментов, биол., фармакол. и других препаратов на лимфоциты. Иногда используют модификацию теста, при к-рой учитывают реакцию между лимфоцитами, моноцитами и гранулоцитами больного и суспензией эритроцитов группы 0 (I) резус-отрицательной, обработанных танином и одним из бактериальных или лекарственных антигенов. Эритроциты трижды отмывают р-ром Ханкса (его используют и в дальнейшем), готовят 0,5% суспензию, обрабатывают ее в течение 10 мин. при t° 37° свежеприготовленным р-ром танина (1 : 10 000) в соотношении с суспензией 1:1. Танинизированные эритроциты отмывают, инкубируют 30 мин. с антигеном, повторно отмывают и используют для реакции с лимфоцитами, взвешенными в аутоплазме (инкубация 45 мин.). Готовят мазки и после окраски подсчитывают процент возникших розеток. Положительной считается проба при количестве розеток от 10% и более.

Л. т. с клетками гранулоцитарного ряда включают реакции нейтрофилов крови (нейтрофильные тесты) и базофилов (см. Базофильный тест). Некоторые нейтрофильные тесты оценивают внутриклеточные дистрофические изменения.

После инкубации опытных и контрольных образцов крови, приготовления мазков и обработки их гематол, красителями просматривают в каждом препарате по 100 нейтрофилов. Предложена следующая градация клеток с дистрофическими изменениями: 1) с небольшим фрагментированием или пикнозом ядра (см. Пикноз), который захватывает лишь отдельные его сегменты; возможен частичный хроматинолиз; 2) с выраженным хроматинолизом, фрагментацией или пикнозом ядра; возможны гиперхроматоз и кариолиз; 3) с полным цитолизом; на месте клетки обнаруживаются лишь остатки ядерного вещества и зернистости.

К числу нейтрофильных тестов относится предложенный В. А. Фрадкиным в 1962 г. тест ППН (показатель повреждения нейтрофилов). Критерием в тесте ППН является амебоидная реакция нейтрофилов на аллерген, специфичный к циркулирующим в крови антителам. В качестве антикоагулянта крови используют р-р цитрата натрия. Лиофилизированные формы аллергенов растворяют в 0,5 — 1,0 мл 5% р-ра цитрата натрия, жидкие формы смешивают с 25% р-ром (4 ч. аллергена и 1 ч. антикоагулянта). Во всех случаях опытным пробам (0,08 мл крови с 0,02 мл подготовленного аллергена) сопутствует контроль: 0,08 мл крови с 0,02 мл 5% р-ра цитрата натрия. Индекс ППН вычисляют по формуле (Но - Нк)/100, где Но — количество поврежденных нейтрофилов в опыте, а Нк — в контроле. Оптимальный способ окраски мазков, приготовленных после 2-часовой инкубации крови при t° 38°, — гистохим, реакция на гликоген с докраской ядер гематоксилином, т. к. амебоидной реакции сопутствует насыщение гликогеном псевдоподий, а отсутствие заметных количеств гликогена в мононуклеарах упрощает подсчет. Допустимо применять и обычные способы окраски мазков крови. В контрольных препаратах число амебоидно-активных нейтрофилов невелико: 1—5, реже 6—10%. Индекс ППН у несенсибилизированных лиц не превышает 0,1; при наличии гиперчувствительности он возрастает в несколько раз.

Библиография: Авербах М. М., Гергерт В. Я. и Литвинов В. И. Повышенная чувствительность замедленного типа и инфекционный процесс, М., 1974, библиогр.; Фрадкин В. А. Аллергодиагностика in vitro, М., 1975, библиогр.

В. А. Фрадкин.