ЛЕВАДИТИ МЕТОД

ЛЕВАДИТИ МЕТОД (С. Levaditi, франц. бактериолог, иммунолог и вирусолог. 1874—1953) — импрегнация бледной трепонемы Шаудинна азотнокислым серебром в кусочке исследуемого материала. Л. м. применяют для изучения топографического распределения трепонем в пораженных органах и тканях. Существуют два варианта серебрения бледной трепонемы по Левадити.

Оригинальный метод используется преимущественно при изучении врожденного сифилиса. Исследуемую ткань обрабатывают следующим образом: 1) кусочки толщиной 1 — 2 мм фиксируют 10% р-ром формалина в течение 24 час.; 2) быстро промывают дистиллированной водой и уплотняют 96 % спиртом в течение 24 час.; 3) промывают дистиллированной водой; 4) импрегнируют 1,5— 3% раствором нитрата серебра в очищенных флаконах из темного стекла, герметически закрытых притертой пробкой, в течение 3 дней при t° 38°; 5) быстро промывают дистиллированной водой; 6) восстанавливают смесью, состоящей из пирогалловой к-ты — 4 г, 40% формалина — 5 мл, дистиллированной воды — 100 мл, в течение 24—48 час. при комнатной тимпературе; 7) промывают дистиллированной водой, проводят через спирты восходящей крепости, ксилол и заливают в парафин; серийные срезы толщиной не более 5 мкм наклеивают альбумином на тщательно очищенные предметные стекла и высушивают в течение 24 час. при t° 37°; 8) после удаления парафина ксилолом срезы заключают в нейтральный канадский бальзам. На удачном препарате фон светло-желтый без осадков, трепонемы — черные. Для уточнения внутриклеточного расположения трепонем импрегнированные срезы докрашивают анилиновыми красителями: а) депарафинированные препараты красят р-ром Романовского — Гимзы (1 : 20) в течение нескольких минут, промывают дистиллированной водой, дифференцируют смесью гвоздичного масла с абсолютным спиртом (1 : 10) и заключают в канадский бальзам; б) окраску депарафинированных срезов производят концентрированным р-ром толуидинового синего, дифференцируют абсолютным спиртом с несколькими каплями глицерин-эфира по Унне и заключают в канадский бальзам. Трепонемы при этом окрашиваются в черный цвет, ядра клеток соединительной ткани, эпителия, лейкоцитов приобретают синий оттенок, фон препарата зеленый.

Второй вариант — метод Левадити — Мануэльяна — рекомендуется для изучения и диагностики первичного и вторичного сифилиса у человека и для изучения экспериментальной инфекции у животных. Первые три этапа соответствуют оригинальному методу. Далее проводят: 1) импрегнацию смесью, состоящей из пиридина — 10 мл, 1 % раствора нитрата серебра — 90 мл, в течение 2—3 час. при комнатной температуре и 3—5 час. при t° 45—50° (в темных флаконах); 2) промывку дистиллированной водой; 3) восстановление смесью из пиридина — 17 мл, ацетона — 10 мл, 4% р-ра пирогалловой к-ты — 90 мл при комнатной температуре в течение 3—5 час.; 4) промывку, приготовление парафиновых блоков и дальнейшую обработку тонких срезов, как при первом варианте.

См. также Серебрения методы.

Библиография: Levaditi С. Sur la coloration du Spirochaeta pallida Schaudinn dans les coupes, C. R. Soc. Biol. (Paris), t. 59, p. 326, 1905; он же, L’histologie pathologique de la syphilis h£reditaire, Ann. Inst. Pasteur, t. 20, p. 41, 1906; Levaditi C. et Manouelian, Nouvelle m£thode rapide pour la coloration des spirochetes sur coupes, G. R. Soc. Biol. (Paris), t. 60, p. 134, 1906.

P. М. Шен.