ОРТО-ТОЛУИДИНОВАЯ ПРОБА

ОРТО-ТОЛУИДИНОВАЯ ПРОБА — количественный метод определения содержания глюкозы в крови и моче, применяемый при сахарном диабете, нефропатиях и др. О.-т. п. не является абсолютно специфичной по отношению к глюкозе, при проведении этой пробы определяются также все альдосахара (галактоза, Манноза и др.), а также олигосахариды, молекулы к-рых состоят из остатков альдосахаров. Проба основана на определении интенсивности окраски, появляющейся при нагревании р-ра, содержащего глюкозу, с о-толуидином в присутствии уксусной к-ты. Принято считать, что интенсивность развившейся окраски пропорциональна содержанию глюкозы в р-ре.

Определение глюкозы в крови с помощью орто-толуидиновой пробы: к 0,9 мл 3% трихлоруксусной к-ты приливают 0,1 мл крови, взятой из пальца, и центрифугируют. К 0,5 мл центрифугата добавляют 4,5 мл о-толуидинового реактива (в 94 мл ледяной уксусной к-ты растворяют 0,15 г тиомочевины и приливают 6 мл о-толуидина), кипятят на водяной бане в течение 8 мин. и охлаждают. Р-р колориметрируют при 590 — 650 нм (оранжевый или красный светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против контрольной пробы, содержащей только реактивы (0,5 мл 3% трихлоруксусной к-ты и 4,5 мл о-толуидинового реактива). Одновременно с опытными пробами проводят определение глюкозы в калибровочном р-ре, содержащем 100 мг глюкозы в 100 мл, образцы к-рого обрабатывают так же, как опытные пробы.

Расчет проводят по формуле:

С_оп = С_к*(Е_оп/Е_к)

где С_оп — концентрация глюкозы в опытной пробе (мг в 100 мл), С_к — концентрация глюкозы в калибровочном растворе (мг в 100 мл), Е_оп — величина экстинкции опытной пробы, E_к — величина экстинкции калибровочной пробы.

Определение глюкозы в моче с помощью орто-толуидиновой пробы: после проведения качественной пробы на содержание глюкозы в моче, напр, при помощи пробы Ниландера (см. Ниландера проба), в зависимости от результата, т. е. при положительной реакции, разводят мочу в 2—10 раз; 0,1 мл разведенной мочи смешивают с 4,5 мл о-толуидинового реактива и далее пробы обрабатывают так же, как и при определении содержания глюкозы в крови. При расчете результатов необходимо учитывать разведение мочи.

Нормальные величины содержания глюкозы в крови, определяемые с помощью О.-т. п., составляют 60— 100 мг в 100 мл. Принимая во внимание неспецифичность О.-т. п., надо учитывать, что содержание глюкозы в крови, определенное этим методом, будет приблизительно на 10 мг в 100 мл превышать содержание глюкозы в этом же образце крови, определенное глюкозооксидазным методом (см. Городецкого методы).

Моча в норме содержит следы глюкозы, не превышающие 0,02%

Библиография: Тодоров Й. Клинические лабораторные исследования в педиатрии, пер. с болг., с. 584, София, 1968; Hyvarinen A. a. N i k k i 1 а Е.А. Specific determination of blood glucose with o-toluidine, Clin. chim. Acta, v. 7, p. 140, 1962.

Л. М. Пименова.