КАСТЕЛЛАНИ МЕТОД

КАСТЕЛЛАНИ МЕТОД (A. Castellani, итал. врач, род. в 1878 г.; син.: метод адсорбции, реакция Кастеллани, метод адсорбции агглютининов по Кастеллани) — иммунологическая реакция, основанная на адсорбции агглютининов микроорганизмами из противомикробных сывороток. Эта реакция предложена Кастеллани в 1902 г. В основе этого метода лежит установленный еще П. Эрлихом и Ю. Моргенротом (1899), а также Ж, Борде (1899) факт, что каждому антигену присуща способность избирательно связывать антитела из соответствующих сывороток, в результате чего последние утрачивают способность вступать в реакцию с антигеном, использованным для адсорбции. Этот феномен Кастеллани использовал с целью удаления из иммунных сывороток соответствующих антител. Он показал, что при иммунизации кроликов смесью из 2—3 штаммов бактерий кишечной группы образуются агглютинины к каждому из них в титрах, зависящих от количества введенного материала и времени взятия крови. При добавлении к такой иммунной сыворотке одного из штаммов происходит адсорбция соответствующих агглютининов, в то время как агглютинины к другим штаммам остаются.

Если в процессе иммунизации животных одним штаммом появляются гетерологичные агглютинины к другому штамму, то адсорбция полученной иммунной сыворотки гомологичным штаммом приводит к потере как гомологичных, так и гетерологичных агглютининов. Адсорбция такой сыворотки другим штаммом, напротив, извлекает агглютинины только к гетеро логичному штамму, агглютинины к гомологичному штамму сохраняются.

К. м. используется для выявления антигенного сходства и различия между микроорганизмами. Наиболее широко он применяется для изучения антигенных свойств кишечной группы бактерий. Его используют также для производства моноспецифических (монорецепторных) сывороток, т. е. содержащих только один вид агглютининов. Такие сыворотки применяются для диагностики и типирования микроорганизмов.

Во Всесоюзном центре по эшерихиям Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова И. В. Голубевой с сотр. (1965) составлена ориентировочная схема для выбора адсорбента при изготовлении ОК-коли-сывороток, максимально освобожденных от гетерологичных агглютининов. Технологический процесс приготовления таких адсорбированных сывороток намного упрощается при использовании заготовленных заранее сухих адсорбентов широкого набора.

Схема реакции перекрестной адсорбции агглютининов по методу Кастеллани представлена в таблице. Иммунные сыворотки, как видно из таблицы, содержат антитела как к соматическим О-антигенам, так и к жгутиковым Н-антигенам.

Для адсорбции иммунной сыворотки штаммы бактерий кишечной группы выращивают в пробирках с мясопептонным бульоном в течение 3 час. при t° 37°. Этот бульон используют для посева в матрацы с 200 мл 1,5% мясопептонного агара, которые помещают в термостат на 18 час. при t° 37°. Затем конденсат сливают и в матрацы вносят по 9 мл изотонического р-ра хлорида натрия, которым тщательно смывают выросшие культуры. Полученные суспензии микроорганизмов разливают по пробиркам и кипятят в водяной бане при t° 100° в течение 1 часа для инактивации H-антигенов. Иммунную сыворотку в количестве 0,2 мл смешивают с 9,8 мл кипяченой культуры. Смесь оставляют при t° 37° в течение 4 час., а затем при t° 4° в течение 18 час. Для освобождения от микроорганизмов производят центрифугирование при 6000 об/мин в течение 55 мин. Надосадочную жидкость, к-рая представляет собой адсорбированную сыворотку, в разведении 1 : 50 декантируют и фильтруют через бактериальные фильтры. Такую сыворотку используют для реакции агглютинации с соответствующими бактериями, предварительно проверив полноту адсорбции. Если произошло неполное освобождение сыворотки от гетерологичных антител, производят повторное ее насыщение адсорбентом.

Для адсорбций жгутиковых Н-агглютининов используются микроорганизмы, убитые формалином.

Успех адсорбции неспецифических антител зависит от ряда факторов: специфичности нативной сыворотки, в к-рой специфические антитела должны значительно превалировать над неспецифическими, подбора и качества адсорбента и условий адсорбции.

Большое влияние на качество адсорбции оказывает правильный выбор штамма-адсорбента. Культура должна находиться в S-форме (см. Диссоциация бактерий). Для обнаружения диссоциации культур может быть рекомендовано применение пробы с кипячением микробных взвесей и микроскопия колоний в косо проходящем свете. В качестве штаммов-адсорбентов следует использовать культуры микроорганизмов, обладающие способностью адсорбировать на себе гетеро логичные агглютинины, но не истощать сыворотку от гомологичных агглютининов.

Специфичность адсорбированных сывороток намного повышается, что имеет существенное значение при использовании их для диагностики инфекционных заболеваний. Реакция Кастеллани является наиболее рациональным методом получения высокоспецифических ОК-коли-сывороток.

Этот метод был применен для получения адсорбированных люминесцирующих ОК- и Н-коли-сывороток. Его широко используют для изучения антигенных свойств ряда других микроорганизмов, а также клеток и тканей в норме и патологии.

Таблица. СХЕМА ПОСТАНОВКИ РЕАКЦИИ ПЕРЕКРЕСТНОЙ АДСОРБЦИИ АГГЛЮТИНИНОВ ПО МЕТОДУ КАСТЕЛЛАНИ

Библиография: Многотомное руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных болезней, под ред. H. Н. Жукова-Вережникова, т. 3, с. 598, М., 1964; Научные достижения в изучении коли-инфекции, под ред. И. В. Голубевой, с. 112, М., 1973; Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, М., 1973; Castellani A. Die Agglutination bei gemischter Infektion und die Diagnose der letzteren, Z. Hyg. Infekt.-Kr., Bd 40, S. 1, 1902; E h г 1 i с h P. u. Morgenroth J. t}ber Haemolysine, Berl. klin. Wschr., S. 569, 1901.

Г. М. Бочко, И. H. Майский.