БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ

БИУРЕТОВАЯ РЕАКЦИЯ — реакция качественного и количественного определения в различных биологических жидкостях белков и продуктов их частичного гидролиза. Основана на образовании в щелочной среде окрашенного солеобразного комплекса веществами, имеющими 2 или более карбоксамидные группы. Окраска биуретового комплекса зависит от количества медной соли и от структуры вещества, с к-рыми координирован ион меди. Так, продукты распада белка — пептоны — образуют комплексное соединение красного оттенка, белки — сине-фиолетового. Реакция белков обусловлена наличием в их молекуле пептидных связей. Биуретовую реакцию могут давать биурет NH₂—CO—NH—CO—NH₂ (откуда возникло название этой реакции), оксамид, глицинамид, малонамид, некоторые аминокислоты (гистидин, серин, треонин) при достаточно большой концентрации их в растворе и др. Предложено несколько способов приготовления биуретового реактива, один из которых описывается ниже: 1,5 г сульфата меди и 6 г сегнетовой соли растворяют в 500 мл воды; добавляют 300 мл 10% раствора едкого натра, свободного от углекислого натрия, и 1 г йодистого калия для предотвращения самопроизвольного восстановления. Раствор доводят водой до 1 л.

Ход определения. К 1 мл исследуемого раствора, содержащего 1 — 10 мг белка, добавляют 4 мл биуретового реактива, перемешивают и оставляют на 30 мин. при комнатной температуре. Оптическую плотность раствора определяют с помощью фото-электроколориметра или спектрофотометра при длине волны 540— 560 нм. Контролем служит проба, содержащая 4 мл биуретового реактива и 1 мл воды или соответствующего солевого раствора. Концентрацию белка в исследуемом растворе определяют по калибровочной кривой, построенной с применением растворов казеина, сывороточного или яичного альбумина известных концентраций.

Определению белков с помощью Б. р. мешает присутствие солей аммония, препятствующих Б. р., т. к. они образуют с ионами меди биуретового реактива медноаммиачные комплексы.

В СССР с 1972 г. Б. р. предложена для обязательного применения во всех клинико-диагностических лабораториях в качестве метода количественного определения общего белка в сыворотке крови, в частности при циррозе печени, почечной недостаточности, миеломной болезни и др.

В норме содержание белка в сыворотке крови, определяемого с помощью Б. р., находится в пределах 6,5—8,5 г%.

Б. р. лежит также в основе широко применяемого в лабораторной практике метода определения белка в крови — Лаури метода (см.).

Библиография: Руководство по клиническим лабораторным исследованиям, под ред. Е. А. Кост и Л. Г. Смирновой, с. 197, М., 1964; Gornal 1 A. G., Bardawill С. J. a. David М. М. Determination of serum proteins by means of biuret reaction, J. biol. Chem., v. 177, p. 751, 1949; Weichselbaum Т. E. Accurate and rapid method for determination of proteins in small amounts of blood serum and plasma, Amer. J. clin. Path., v. 10, p. 40, 1946.