ЦИТОФОТОМЕТРИЯ

ЦИТОФОТОМЕТРИЯ (греческий kytos вместилище, здесь — клетка + phos, photos свет + metreo мерить, измерять; синоним: цитоспектрофотометрия, микрофотометрия) — цитохимический метод исследования, позволяющий определять химический состав клеток по поглощению ими света. Цитофотометрию применяют для химического и морфологического изучения гетерогенных (по свойствам, происхождению) клеточных популяций, дифференциального хим. анализа структур одной клетки (например, хромосом одного набора, ядрышка и др.), для исследования динамики перемещения веществ в клетке и их изменений во времени. Кроме того, цитофотометрию используют для диагностики, а также для выяснения прогноза заболевания. Например, по числу определяемых с помощью цитофотометрии полиплоидных клеток оценивают интенсивность роста злокачественной опухоли.

Принципы цитофотометрии разработаны в 1936 году шведским ученым Касперссоном (T. Caspersson).

При цитофотометрии через препарат пропускают пучок монохроматического света И определяют его поглощение клеткой. Прибор для цитофотометрии — цитофотометр — включает микроскоп, монохроматор, позволяющий получать излучение одной длины волны, устройство для измерения света (обычно фотоумножитель), регистратор измерений. Современные цитофотометры снабжены компьютером, видеоустройством , графопостроителем. Концентрацию исследуемого вещества вычисляют по закону Бугера — Ламберта — Бера (см. Колориметрия), устанавливающему связь между поглощением света веществом, его концентрацией и толщиной слоя. Чувствительность метода — около 10-12 г вещества в структуре площадью приблизительно 1 мкм². Точность цитофотометрии снижается вследствие неравномерного распределения вещества внутри клетки. Для предотвращения ошибки используют сканирующую цитофотометрию — измерение оптической плотности клетки малым (диаметр порядка 0,5 мкм) двигающимся зондом.

Цитофотометрия в УФ-области спектра позволяет определять в неокрашенных препаратах количество нуклеотидов, нуклеиновых кислот, белков по естественному поглощению ими УФ-лучей. Более широкое распространение получила цитофотометрия в видимой области спектра; при этом используют естественную окраску отдельных веществ (например, гемоглобина, пигментов) или, чаще, искусственное окрашивание препаратов гистохимическими красителями, связывающимися с химическими компонентами клетки в определенных количествах. С помощью красителей выявляют в клетке нуклеиновые кислоты, белки и их отдельные реактивные группы, а также определяют активность ряда ферментов, содержание липидов и полисахаридов.

В результате применения цитофотометрии были получены данные о роли нуклеиновых кислот в передаче наследственных признаков, выявлена связь между изменением содержания РНК и белков в клетке и функциональным состоянием клетки (возбуждение, торможение и др.,), установлено биологическое значение клеточной полиплоидии. Кроме того, материалы, полученные с помощью цитофотометрии, способствовали формированию современных представлений о росте и регенерации тканей, клеточных механизмах гипертрофии.

Библиогр.:

Агроскин Л. С. и Папаян Г. В. Цитофотометрия, Л., 1977;

Бродский В. Я. Трофика клетки, М., 1966; Caspersson Т. О. Cell growth and cell function, N. Y., 1950.

В. Я. Бродский.