ДОФА-РЕАКЦИЯ

ДОФА-РЕАКЦИЯ — метод выявления меланобластов — клеток, вырабатывающих меланин и его бесцветные предстадии, заключающийся в обработке тканей раствором L-3,4-диоксифенил аланина (Dioxyphenilalanin). Реакция получила сокращенное обозначение DOPA (ДОФА в русском произношении) по начальным буквам слагаемых слов. Метод предложен в 1917 г. Б. Блохом.

Биохим, сущность метода состоит в том, что фермент меланин (см.). Положительную Д.-р. дают только меланобласты, а в меланофорах, клетках, поглотивших пигмент, реакция всегда отрицательна. Существует много модификаций метода для исследования замороженных и парафиновых срезов с применением авторадиографии и электронной микроскопии. Реакция, требующая инкубации клеток, содержащих тирозиназу, в р-ре с диоксифенилаланином на практике не всегда удавалась, результаты ее часто были недостаточно достоверны. Чувствительность и достоверность ее значительно повысились с применением в фиксирующих р-рах 0,1 М какодилатного буфера с pH 7,4, способствующего сохранению тирозиназной активности; на этом буфере приготавливается 4% р-р формальдегида или 2% р-р глютаральдегида. Основной ДОФА-раствор, в к-ром инкубируются кусочки исследуемой ткани, состоит из двух частей, смешиваемых в равных пропорциях непосредственно перед употреблением. Р-р А: 0,2 М водный р-р какодилата натрия pH 7,4; для его приготовления растворяют 42,8 г реактива и 9,6 мл 1 н. HCl в 500 мл дистиллированной воды, а затем объем р-ра доводят до 1000 мл. Р-р Б: 0,2% р-р ДОФА в дистиллированной воде. Оба р-ра хранят до употребления раздельно при t° 4° в течение нескольких месяцев.

Реакция проводится следующим образом: ткань режется в криостате; срезы, помещенные на стекло, фиксируются при комнатной температуре в течение 1 часа в 4% р-ре формальдегида или в 2% р-ре глютаральдегида, затем промываются в буферном р-ре какодилата натрия и инкубируются при t° 37° в течение 4—7 час. в р-ре ДОФА. При заливке в парафин кусочки ткани 0,1—0,2 см толщиной фиксируются в тех же фиксаторах, обрабатываются ДОФА-раствором, дополнительно фиксируются в 10% нейтральном формалине и заливаются в парафин; гистол, препараты готовятся обычно. Предложенная методика позволяет производить исследование замороженных и парафиновых срезов в световом, а также в электронном микроскопе. При микроскопии цитоплазма меланобластов диффузно или гранулярно окрашена в коричнево-черный цвет.

Д.-р. применяется для обнаружения меланобластов с целью диагностики беспигментных родимых пятен и меланом в биопсийном и секционном материале.

Библиография: Гайeр Г. Электронная гистохимия, пер. с нем., с. 84 и др., М., 1974; Пирс Э. Гистохимия, теоретическая и прикладная, пер. с англ., с. 464, М., 1962; P о м e й с Б. Микроскопическая техника" пер. с нем., с. 281, М., 1953; Voorhess М. L. Urinary excretion of DOPA and metabolites by patients with melanoma, Cancer, v. 26, p. 146, 1970, bibliogr.

А. М. Вихерт.