ДИАЗОРЕАКЦИЯ
Описание
Диазореакция (син. диазореакция Эрлиха) — цветная реакция между реактивом Эрлиха (диазофенилсульфоновой кислотой) и рядом органических веществ, способных реагировать с ароматическими диазосоединениями (пиррол, крезол, индикан и др.); используется в общей и клинической биохимии и гистохимии. Предложена П. Эрлихом в 1882 г. П. Эрлих в 1883 г. указал, что билирубин вступает в соединение с диазониевыми солями, давая характерное красное окрашивание.
Широкое применение Диазореакция получила в клинике именно при качественном и количественном определении гистамина (см.). Белки, в молекулу которых входят аминокислоты тирозин, триптофан и гистидин, дают с диазореактивом оранжево-красное окрашивание.
Диазореактив готовят непосредственно перед употреблением смешиванием двух р-ров — 0,15—0,5% р-ра сульфаниловой к-ты в разбавленной соляной к-те и 0,5% р-ра азотистокислого натрия, в результате чего происходит следующая реакция:
Вещества, дающие с диазофенилсульфоновой к-той цветную реакцию, замещают в ней атом хлора, результатом чего является образование окрашенного азосоединения.
При определении некоторых веществ в качестве компонента для получения окрашенного диазосоединения употребляется не сульфаниловая к-та, а другие ароматические амины, напр, при определении фенолов в крови и в моче — n-нитроанилин, при определении сульфаниламидов— 2R-кислота и т. д.
Диазореакция в моче
В норме Диазореакция в моче отрицательна. В случае положительной реакции при добавлении диазореактива и аммиака появляется карминово-красное окрашивание (П. Эрлих, 1882). Диазореакция в моче высокоспецифична для билирубина, другие желчные пигменты (см.) в моче не дают подобной реакции. Алкалоиды опия, сульфаниламиды, салол, сальварсан, ревень, нафталин, креозот, выделяющиеся с мочой, могут давать сходную цветную реакцию.
Ход определения
К 10 мл свежеприготовленного диазореактива прибавляют 10 мл свежей мочи, смешивают, приливают 2 мл аммиака (NH4OH) лочной реакции и хорошо встряхивают. При положительной реакции появляется розовое или карминово-красное окрашивание. Реакция считается положительной, если окрашена не только жидкость, но и образовавшаяся пена. Желтая или оранжевая окраска свидетельствует об отрицательной реакции. Сомнительную Д. нужно признать отрицательной. Интенсивность Д. оценивается количественно путем сравнения с окраской, образующейся в результате Д. со стандартным р-ром нафтолсульфокислого натрия. Хантер (G. Hunter, 1930), используя принцип Д., увеличил точность определения билирубина в моче путем предварительного осаждения его хлористым барием. Реакция проводится следующим образом: к 10 мл подкисленной мочи добавляют 4 мл 10% BaCl2, перемешивают, центрифугируют, осадок промывают дист, водой, затем в пробирку последовательно добавляют 0,5 мл реактива Эрлиха, 2 мл 96 % спирта и 0,3 мл 6% двузамещенного фосфорнокислого натрия. Смесь повторно центрифугируют. В присутствии билирубина надосадочная жидкость окрашивается в розовый цвет. Чувствительность метода 1 : 666 000. Иногда вместо реактива Эрлиха в этой реакции используют натрий изопаранитродиазобензол.
Однако, несмотря на специфичность и высокую чувствительность, Д. для определения билирубина в моче имеет свои недостатки. Ее точность зависит от степени свежести мочи, температуры мочи и ее прозрачности (мутную мочу приходится фильтровать), метод относительно трудоемок. Поэтому Д. для определения билирубина в моче не рекомендована в качестве унифицированного метода.
В первой половине 20 в. определению интенсивности Д. в моче придавали очень большое диагностическое и прогностическое значение, однако позднее она стала использоваться только как вспомогательный диагностический тест. Д. бывает почти всегда положительной при инфекционных заболеваниях, сопровождающихся лихорадочным состоянием, особенно при брюшном тифе и кори.
При брюшном тифе Диазореакция обычно положительна уже на 3—4-й день заболевания и остается такой в течение всей болезни. При рецидиве брюшного тифа Д. снова становится положительной, что помогает дифференцировать рецидив с осложнениями болезни. Если при разведении мочи 1 : 50 и более сохраняется положительная Д., это свидетельствует о тяжелом течении заболевания. Раннее исчезновение положительной Д. рассматривается как благоприятный прогностический признак.
При кори положительная Д. в моче часто отсутствует в период высыпания, но почти постоянно обнаруживается на стадии шелушения. При помощи Д. можно отличить корь от краснухи, при к-рой Д. всегда отрицательна.
Помимо этих заболеваний, Диазореакция положительна при ревматизме, рожистом воспалении, пневмонии, милиарном туберкулезе, трихинеллезе. Положительная Д. при туберкулезе легких, как правило, свидетельствует о тяжелом течении заболевания. При некоторых тяжелых инфекционных болезнях (скарлатине, дифтерии и др.) Д. почти всегда отрицательна.
Диазореакция в крови
Диазореакция в крови применяется преимущественно для определения билирубина; практически это является ее важнейшим применением в клинической лабораторной диагностике. Эту реакцию Ван-ден-Берг (A. A. Hijmans van den Bergh) в 1913 г. впервые использовал для качественного и количественного определения билирубина в сыворотке крови (см. Ендрашика-Клегхорна-Грофа метод).
Библиография Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, М., 1969; Ворожцов H. Н. Основы синтеза промежуточных продуктов и красителей, М.— Л., 1950; Цоллингeр Г. Химия азокрасителей, пер. с нем., Л., 1960.
И. Б. Фридлянд, Ю. М. Гефтер.