АНТИЛИМФОЦИТАРНАЯ СЫВОРОТКА

Антилимфоцитарная сыворотка (АЛС, ALS; греческий anti- против + лимфоцит[ы]) — иммунная сыворотка, содержащая различного рода антитела к лимфоидным клеткам, преимущественно к лимфоцитам.

Название антилимфоцитарная сыворотка сопровождается наименованием вида животного, от которого получена сыворотка, а также наименованием вида, против ткани которого выработаны антитела, например: кроличья антикрысиная, лошадиная античеловеческая и т. п.

Антилимфоцитарная сыворотка впервые получена И. И. Мечниковым в 1899 году при иммунизации морской свинки селезеночной тканью крысы. А. М. Безредка в 1900 году продемонстрировал цитотоксическое действие антилимфоцитарной сыворотки на лимфоидные клетки in vitro; позднее было показано лейко- и лимфопеническое действие антилимфоцитарной сыворотки in vivo, а также ингибирующее действие на развитие реакций гиперчувствительности замедленного типа. Последние свойства антилимфоцитарной сыворотки привлекли внимание трансплантологов, поскольку появилась возможность воздействия на реакции трансплантационного иммунитета, которые опосредуются через лимфоидные клетки. Интенсивное изучение и использование антилимфоцитарной сыворотки началось с 1963 — 1964 годы, когда Вудрафф и Андерсон (М. Woodruff, N. Anderson) добились значительного удлинения сроков выживания аллогенного кожного лоскута у крыс при использовании кроличьей антикрысиной АЛС.

Получение

Антилимфоцитарную сыворотку получают путем иммунизации животных одного вида (продуцент) лимфоидными клетками другого вида (донор). Продуцентами могут служить: мыши, крысы, морские свинки, собаки и др. Для получения антилимфоцитарной сыворотки в лечебных целях в качестве продуцентов используют кроликов, лошадей, иногда обезьян, ослов.

Для иммунизации используют клетки селезенки, лимфатических узлов, тимуса, лимфоциты, полученные прижизненно путем дренирования грудного лимфатического протока (ductus thoracicus); имеется опыт получения антилимфоцитарной сыворотки путем иммунизации тканью миндалин человека. Наибольшей иммунодепрессивной активностью обладают антилимфоцитарные сыворотки, полученные иммунизацией клетками тимуса и лимфоцитами грудного лимфатического протока.

Иммунизация предусматривает различные схемы; введение может быть внутривенным, внутрибрюшинным, внутримышечным, подкожным; при двух последних антиген вводят в адъюванте Фрейнда; используют комбинированные схемы — внутривенное с последующим подкожным введением антигена; количество лимфоидных клеток, вводимых за одну инъекцию,— 0,2—50 млрд. в зависимости от вида продуцента и его размеров.

Очистка и обработка

В полученных путем кровопускания сыворотках определяются гемагглютинины (и гемолизины) в значительных количествах, удаление которых производят одно-двукратной (для экспериментальных целей) или многократной (для лечебных целей) адсорбцией, используя эритроциты донора (20— 30% от общего объема сыворотки). Присутствие гемагглютининов и гемолизинов допустимо в титрах менее чем 1 : 16. Антитромбоцитарные антитела допустимы в титрах, не превышающих 1 : 8 в реакции связывания комплемента. Антилимфоцитарную сыворотку, используемую в лечебных целях, инактивируют прогреванием в водяной бане при t° 56° в течение 20—30 минут.

Обработка антилимфоцитарной сывороткой может быть закончена выделением активного начала — антилимфоцитарного γ-глобулина, которое производят путем этанолового фракционирования или фракционной экстракцией 40% сульфатом аммония с последующим диализом против дистиллированной воды. Дальнейшая обработка с использованием Sephadex G-200 показывает, что большая часть антилимфоцитарной активности локализуется в IgG-фракции.

Активность антилимфоцитарной сыворотки характеризуют по комплексу тестов

1. Увеличение длительности выживания (пролонгация) кожного лоскута служит показателем собственно иммунодепрессивной активности. Этот тест выполняется на лабораторных животных с учетом выживания аллогенного кожного лоскута в группе, получающей антилимфоцитарную сыворотку, и в контрольной группе. Нормальные сроки отторжения аллогенного кожного лоскута 7—8 или 10—13 дней в зависимости от вида лабораторного животного. Активная антилимфоцитарная сыворотка увеличивает сроки жизни аллотрансплантата от нескольких дней до нескольких недель.

2. Цитотоксическое действие на лимфоидные клетки: выполняется in vitro по методу Горера — О’Гормана (1957) или его модификациям на лимфоцитах животного-донора с использованием прижизненного красителя трипанового голубого.

3. Угнетение первичного иммунного ответа на тканевой, белковый или бактериальный антиген; выполняется на мелких лабораторных животных при иммунизации эритроцитами барана, бычьим сывороточным альбумином или культурой бактерий; значительное снижение титров антител у животного, обработанного антилимфоцитарной сывороткой, по сравнению с антителообразованием у нормального животного служит показателем активности антилимфоцитарной сыворотки. Ингибирующим действием обладает именно антилимфоцитарный γ-глобулин, поскольку нормальный IgG такого эффекта не вызывает.

4. Трансформирующая активность изучается in vitro по способности вызывать бласттрансформацию лимфоцитов (см. Иммунитет трансплантационный). Сравниваются нестимулированные и стимулированные под действием антилимфоцитарной сыворотки 2—3-дневные культуры лимфоцитов; учет реакции производится путем морфологического исследования культур или по включению радиоактивного H³-тимидина или С¹⁴-глицина в ДНК или РНК делящихся лимфоцитов.

5. Торможение розеткообразования: лимфоциты человека или мышей будучи смешаны в солевом растворе с эритроцитами барана могут in vitro формировать «розетки» вследствие иммунного прилипания к их оболочке эритроцитов барана. Активная антилимфоцитарная сыворотка, введенная человеку или мыши, ингибирует спонтанное «розеткообразование» при инкубации тест-лимфоцитов с эритроцитами барана (90 минут, t° 37°). Чувствительность реакции ингибиции возрастает в присутствии комплемента морской свинки. Сыворотки, предназначенные для клинического использования, испытываются с применением названных тестов на приматах. Первичный отбор производится на низших обезьянах (макаки-резусы, павианы) и окончательный — на шимпанзе.

Практическое применение

В эксперименте показано, что антилимфоцитарная сыворотка способна увеличивать сроки выживания алло-генного кожного лоскута у мышей, крыс, кроликов, обезьян. Ареактивность, создаваемая антилимфоцитарной сывороткой по отношению к аллотрансплантату, распространяется на вторичный трансплантат и на ксенотрансплантат. Антилимфоцитарная сыворотка удлиняет также сроки выживания почки и печени, пересаженных крысам и собакам.

Клиническое использование осуществляется пока в двух направлениях. Известны случаи применения антилимфоцитарной сыворотки при заболеваниях, в патогенезе которых имеется аутоиммунный компонент (острый рецидивирующий ревматизм, ревматоидный полиартрит и др.). При этом наблюдается улучшение состояния, нормализация показателей, характеризующих заболевание (замедление РОЭ, исчезновение болей в суставах, исчезновение выпота в суставные сумки).

В последние годы антилимфоцитарная сыворотка и антилимфоцитарный глобулин широко используют при трансплантации жизненно важных органов, в первую очередь почки. С 1971 года большинство трансплантаций почки проведено при использовании антилимфоцитарной сыворотки в качестве иммунодепрессивного агента.

В клинике трансплантаций антилимфоцитарную сыворотку используют всегда в комплексе с другими иммунодепрессивными веществами (см.). Включение антилимфоцитарной сыворотки в комплекс иммунодепрессивной терапии увеличивает длительность выживания почечных трансплантатов, взятых от живых родственных доноров. В тех случаях, когда применение антилимфоцитарной сыворотки в общей схеме иммунодепрессии существенно не удлиняло сроков жизни почечного трансплантата, оно тем не менее было полезным, так как позволяло снижать дозу кортикостероидов и, следовательно, уменьшать частоту возникновения инфекционных осложнений.

Человеку антилимфоцитарную сыворотку вводят внутримышечно, подкожно, внутривенно. Первой инъекции антилимфоцитарной сыворотки должна предшествовать проба по Безредке на повышенную чувствительность. Внутримышечное и подкожное введение антилимфоцитарной сыворотки иногда сопровождается чувством жжения и болью в месте введения, припухлостью, покраснением, подъемом t° до 38—39°. Внутривенное введение (медленное, капельным методом) безболезненно, однако в определенной степени рисковано из-за возможности развития анафилактического шока или токсических изменений в почке. Однократное введение антилимофцитарной сыворотки вызывает лимфопению, заметную уже через 5 минут после инъекции. Число лимфоцитов в период 4—12 часов после инъекции снижается на 20—80%; нормализация наступает через несколько суток; параллельно лимфопении иногда развивается лейкопения. При длительном введении антилимфоцитарной сыворотки число лимфоцитов устанавливается на определенном уровне и может вернуться к исходным цифрам.

При трансплантации почки реципиенту вводят 3—10 мл антилимфоцитарного γ-глобулина в день (соответственно в пересчете на белок). Схемы использования различны, наиболее употребима следующая: ежедневно в течение двух недель перед трансплантацией и затем каждые два дня в течение месяца после пересадки почки, обязательно с азотиоприном (имураном и кортикостероидами); введение последних прекращается с 3-й недели. Применение антилимфоцитарной сыворотки может быть удлинено в зависимости от характера трансплантата (родственный, от трупа и т. д.) и состояния реципиента.

Побочные действия и осложнения

1. Длительное введение антилимфоцитарной сыворотки может вызвать патологические изменения в паренхиматозных органах, а также вследствие тромбопенического действия сопровождаться внутренними кровоизлияниями. Перед использованием антилимфоцитарной сыворотки в лечебных целях проводят пробы на токсический и геморрагический эффекты, заключающиеся в многократном введении (7—8 дней) антилимфоцитарной сыворотки мелкому лабораторному животному с последующим гистологическим обследованием паренхиматозных органов и с учетом внутренних кровоизлияний.

2. Введение гетерологичного глобулина (в виде антилимфоцитарной сыворотки или антилимфоцитарного γ-глобулина) сопровождается появлением преципитинов, направленных к белкам животного-продуцента. Этот процесс ускоряет элиминацию антилимфоцитарной сыворотки из организма, что было доказано с использованием радиоактивной метки. Кроме того, преципитаты иммунного комплекса, осаждаясь в трансплантированном органе (почке), могут явиться причиной поражении почек.

3. Некоторые партии антилимфоцитарной сыворотки обладают пирогенным действием (подъем t° до 38—39°), вызывают припухлость, отечность и гиперемию в месте инъекции. См. также Цитотоксины.

Библиография: Краскина H. A., Холчев Н. В. и Лопатина Т. К. Характеристика депрессивного действия антилимфоцитарной сыворотки и антилимфоцитарного глобулина на продукцию антител у мышей, Журн. микр., эпид, и иммун., № 2, с. 83, 1971; Медавар П. Б. Биологическое действие гетерологичных антилимфоцнтарных сывороток.в кн. Пересадка органов и тканей у человека, под ред. Ф. Рапапорта и Ж. Доссе, пер. с англ., с 411, М., 197 3, библиогр.; Balner Н. In vivo evaluation of antihuman lymphocyte, Fed. Proc., v. 29, p. 117, 1970; James K. Anti-lymphocytic antibody, Clin. exp. Immunol., v. 2, p. 615, 1967, bibliogr.; Metchnikoff E. Etude sur la resorption des cellules, Ann. Inst. Pasteur, 1.13,p. 737, 1899; Stаrzl T.E.Heterologous antilymphocyte globulin, histoincompatibi-lity matching, and human renal homotransplantation, Surg. Gynec. Obstet., v. 126, p. 1023, 1968, bibliogr.; Traeger J. a. Utilisation chez l’homme de globulines antilymphocytaires, Minerva nefrol., t. 15, p. 96, 1968, bibliogr.; Woodruff M. F. A. Immunosuppression by antilymphocytic serum, в кн.: Organ transplantation today, ed. by N. A. Mitchison a. o., p. 90, Amsterdam, 1969; Woodruff M. F. A. a. Anderson N. F. The effect of lymphocyte depletion by thoracic duct fistula and administration of antilym-phocytic serum on the survival of skin homografts in rats, Ann. N. Y. Acad. Sci., v. 120, p. 119, 1964.

Ю. М. Зарецкая.