АНСОНА-ЧЕРНИКОВА МЕТОД

АНСОНА—ЧЕРНИКОВА МЕТОД — метод количественного определения активности протеолитических ферментов: пепсина, пепсиногена в желудочном соке и уропепсина в моче. Предложен Ансоном (M. L. Anson, 1939); модифицирован для клинического применения советским биохимиком М. П. Черниковым в 1955 году.

В основу метода положено определение степени ферментативного гидролиза белка гемоглобина с освобождением тирозина и триптофана, по содержанию которых судят о пептической активности биологической жидкости.

Определение активности пепсина

В сосуд наливают 1 мл 1% раствора гемоглобина, 3 мл трихлоруксусной кислоты и в последнюю очередь 1 мл раствора исследуемой жидкости, содержащей фермент. Инкубацию проводят в течение 10 минут при t° 37°; спустя 1 час реакционную смесь фильтруют и измеряют оптическую плотность фильтрата при 280 нм против смеси 3 мл трихлоруксусной кислоты и 2 мл дистиллированной воды.

За единицу активности принята протеиназная единица (по гемоглобину), то есть количество фермента, которое при данных условиях за 1 минуту приводит к возрастанию оптической плотности фильтрата на одну единицу.

Определение активности пепсиногена и уропепсина

В основе определения пепсиногена лежит различие в стабильности пепсина и его проферментов в зависимости от pH среды (пепсин человека необратимо инактивируется при pH более 8,0, тогда как соответствующие пепсиногены в этих условиях стабильны).

С этой целью раствор, содержащий пепсин и пепсиноген, подщелачивают 1 н. раствором едкого натра до pH 8,0, а затем подкисляют 1 н. раствором соляной кислоты до pH 2,0 для перевода пепсиногена в пепсин. Дальнейшее определение — по описанию, сделанному выше.

Пепсиноген, секретируемый в слизистой оболочке желудка, в небольших количествах попадает в кровь и экскретируется с мочой как уропепсиноген (уропепсин, пепсиноген мочи). Для превращения уропепсиногена в пепсин мочу подкисляют до pH 2,5—3,0 с помощью 1 н. раствора соляной кислоты, инкубируют 1 час при t° 37° и определяют пепсин, как описано выше.

При определении активности пепсина в желудочном соке с пониженной кислотностью следует определять и пепсиноген, поскольку в ином случае будет определяться активность суммарного количества пепсина (собственно пепсина и пепсина, образованного из пепсиногена).

Определение активности уропепсиногена мочи позволяет косвенно судить о секреции пепсина, так как содержание уропепсиногена пропорционально концентрации в желудочном соке соляной к-ты. Количество уропепсиногена значительно возрастает при язве двенадцатиперстной кишки (при язве желудка активность уропепсиногена не отклоняется от нормы и находится в пределах 200—450 протеииазных единиц). Количество уропепсиногена снижается при карциномах желудка, при анемиях и некоторых других патологических состояниях.

Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 197, Ж., 1969; Шамрай Е. Ф. и Пащенко А. Е. Клиническая биохимия, с. 230, М., 1970.

В. Я. Максимов.