АЛЛЕНА-ХЕЙУЭРДА-ПИНТО МЕТОД

АЛЛЕНА-ХЕЙУЭРДА-ПИНТО МЕТОД (W. М. Allen, S. J. Hay ward, A. Pinto, 1950) — количественное определение дегидроэпиандростерона в моче. Метод предложен в 1950 году.

Дегидроэпиандростерон (гормон из группы 17-кетостероидов) вырабатывается корой надпочечников; определение содержания его в моче имеет важное диагностическое значение при заболеваниях надпочечников. Так, выделение гормона возрастает при адрено-генитальном синдроме (см.), обусловленном опухолями надпочечников. При этом между степенью поражения органа и количеством гормона в моче наблюдается прямая зависимость. В случае диффузной адренокортикальной гиперплазии содержание дегидроэпиандростерона остается в пределах верхней границы нормы. В моче, содержащей 17-кетостероиды, при добавлении смеси этилового спирта с концентрированной серной кислотой появляется фиолетовое окрашивание. Интенсивность окраски пропорциональна количеству дегидроэпиандростерона.

Техника определения

50 мл суточной мочи подкисляют 2—3 мл конц. H₂SО₄ и гидролизуют 30 минут на кипящей водяной бане. В горячем гидролизате растворяют 32 г сернокислого аммония и оставляют стоять на ночь. После этого раствор фильтруют, фильтр с осадком переносят в стаканчик на 50 мл. Осадок, оставшийся на дне и стенках колбы, растворяют в смеси 10 мл 1 н. раствора едкого натра и 10 мл эфира и также переносят в стаканчик.

После растворения всего осадка (в стаканчике) жидкость фильтруют через стеклянную вату в делительную воронку. Через 10—15 мин. происходит расслоение жидкости: нижний слой содержит эстрогены, верхний (эфирный слой) — нейтральные 17-кетостероиды. Эфирный слой отделяют, промывают 5—8 мл 1 н. раствора едкого натра, затем 10—12 мл 0,1 н. раствора серной кислоты и таким же количеством дистиллированной воды. 2 мл эфирного экстракта переносят в пробирку и удаляют эфир (на водяной бане при t° 45°). Осадок помещают в эксикатор на 1 час для удаления влаги, после чего к нему добавляют 0,2 мл 95% этанола; после перемешивания спирт выпаривают при t° 70°. К сухому осадку добавляют 2 мл смеси 90% этанола и концентрацию серной кислоты (1:4), нагревают 12 минут при t° 55°, охлаждают и добавляют 3 мл 95% этанола. Перемешивают и оставляют на 1 час при комнатной температуре. Появляется темно-фиолетовая окраска, интенсивность которой измеряют на спектрофотометре при длине волны 600 нм.

Количество гормона определяют по калибровочной кривой, построенной для чистого дегидроэпиандростерона. Расчет содержания дегидроэпиандростерона в суточной моче проводят по формуле:

X = (А•В•Д) / (М•Н•К),

где X — количество дегидроэпиандростерона в мг за 24 часа; А — содержание дегидроэпиандростерона в пробе; В — объем эфирного экстракта; Д — суточный диурез в мл, М — количество эфирного экстракта, взятое для определения дегидроэпиандростерона; Н — объем мочи, взятой для анализа; К — коэффициент пересчета, равный 2,35.

В норме содержание дегидроэпиандростерона в суточной моче составляет 0,8—1,0 мг и не превышает 10—15% от общего количества 17-кетостероидов.

См. также 17-кетостероиды.

Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А.А. Покровского, с. 533, М., 1969; Уваровская О. М. Модификация метода количественного определения 3(α)- и 3(β)-фракций нейтральных 17-кетостероидов в моче, Пробл. эндокрин. и гормонотер., т. 8, №2, с. 76, 1962; All en W. М., Hay ward S. J. a. Pintо A. A color test for dehydroiso-androsterone and closely related steroids, of use in the diagnosis of adrenocortical tumors, J. clin. Endocr., v. 10, p. 54, 1950.

В. Я. Максимов.