ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСКА

Категория :

Описание

ВИТАЛЬНАЯ ОКРАСКА (лат. vitalis жизненный, живой) — прижизненная окраска животных или растительных клеток и тканей. С этой целью пользуются почти безвредными или малотоксичными красителями. Впервые витальное окрашивание произвел австрийский ученый Унгер (F. Unger, 1848), который ввел в белые лепестки гиацинта сок красных плодов Phytolacca. В гистофизиологии животных В. о. с помощью аммиачного кармина и индиго-сернокислого натрия впервые была применена русским ученым Н. А. Хржонщевским (1864, 1866) при исследовании функции почек и печени.

В. о. является одним из важных экспериментальных методов цито- и гистофизиологии. Иногда В. о. используется в клинике в качестве функциональной пробы при изучении физиологической полноценности почек (см. Хромоцистоскопия).

С помощью В. о. возможно: 1) изучение закономерностей поступления, накопления и выделения веществ, участвующих в метаболизме организма; 2) визуальное исследование некоторых физиол, процессов (секреции, экскреции); 3) маркировка определенных участков организма (органов, эмбриональных зачатков животных и растений, клеток или их органелл); 4) изучение физиол, состояния клетки в норме и при различных раздражающих и повреждающих воздействиях; 5) обнаружение в клетке определенных хим. веществ (нуклеиновых кислот, белков). Наиболее удобный объект для проведения В. о.— культуры клеток и тканей, однако В. о. успешно применяется и для кусочков органов и даже небольших животных и растений, целиком погружаемых в краситель. В. о. проводится также путем инъекции красителя в животную или растительную ткань. Распределение красителя в клетках и тканях обычно наблюдают под светооптическим микроскопом, а в тех случаях, когда для В. о. используют флюоресцирующие красители (флюорохромы),— с помощью люминесцентного микроскопа, что значительно повышает чувствительность исследования.

Рис. 1. Макрофаг из подкожной соединительной ткани крысы (толуидиновый синий).
Рис. 2. Чешуя лука при различной реакции среды: а — pH = 4,7 — окрашены только оболочки клеток; — pH = 7,2 — диффузно окрашен клеточный сок вакуолей (нейтральный красный).
Рис. 3. Нервные клетки пиявки: а — в норме, краситель отложился в виде гранул, ядро не окрашено; 6— в условиях паранекроза, диффузная окраска цитоплазмы, окрашены структуры ядра (нейтральный красный).

Для В. о. используют гл. обр. различные анилиновые красители, применяемые при гистол, методах исследования: кислотные (анионные), основные (катионные) и нейтральные (цветн. рис. 1—3). Водные растворы кислотных красителей плохо проникают в нормальную клетку. Поскольку проницаемость резко повышается при повреждающих воздействиях, эти красители (эозин) используют для выявления клеточного повреждения. Коллоидные растворы кислых красителей (трипановый синий, литиевый кармин и др.) проникают в клетку путем фагоцитоза и используются гл. обр. для изучения ретикулоэндотелиальной системы.

Основные красители, как правило, хорошо проникают в живую клетку. Их дальнейшее распределение в клетке зависит от ее состояния. В неповрежденной или мало поврежденной клетке основные красители аккумулируются в лизосомах в виде ясно выраженных цитоплазматических гранул, поэтому флюорохром акридиновый оранжевый широко используется для прижизненного выявления лизосом. При значительном повреждении клетки прекращается накопление красителей в лизосомах и появляется диффузная окраска ядра и цитоплазмы. Изменение окраски может носить обратимый характер — так наз. паранекроз (см.).

Особое место среди основных красителей занимает янус зеленый, обладающий способностью избирательно аккумулироваться в митохондриях; его широко используют для их прижизненного выявления.

Многие нейтральные или слабо-ионизированные основные красители и флюорохромы (фосфин 3R, бензпирен) обладают хорошей растворимостью в жирах и поэтому применяются для прижизненного выявления жировых включений.

Безвредность красителей, применяемых для В. о., относительна, они всегда влияют на те или иные клеточные процессы: янус зеленый блокирует дыхание, акридиновый оранжевый тормозит синтез белка; длительное воздействие нейтральным красным, акридиновым оранжевым, толуидиновым синим и т. п. приводит к агглютинации рибосом с образованием так наз. кринома — базофильной цитоплазматической структуры, возникающей в клетке под влиянием В. о.

См. также Гистологические методы исследования.


Библиография: Граменицкий E. М. Прижизненная окраска клеток и тканей в норме и патологии, Л., 1963, библиогр.; Зеленин А. В. Взаимодействие амино-производных акридина с клеткой, М., 1971, библиогр.; Левин С. В. и Гольфанд К. А. Методика цитофотометрии витально окрашенных клеток, Цитология, т. 6, № 4, с. 525, 1964, библиогр.


Ю. И. Афанасьев, С. Я. Залкинд.