РАУЛЯ-КРЕПИ МЕТОД

РАУЛЯ-КРЕПИ МЕТОД (Y. Raoul, О. Crepy) — количественный метод определения никотиновой кислоты и ее амида (ниацина, витамина PP) в крови. Р. — К. м. используется для контроля за концентрацией никотиновой кислоты (см.) и ее амида в крови больных, принимающих никотиновую к-ту и никотинамид как лекарственное средство. Метод предложен в 1937 г.

Припцип Р.— К. м. заключается в том, что ниацин образует при взаимодействии с цианистым бромом и n-аминофенилсульфонамидом (реакция Кенига) соединение, окрашенное в желтовато-оранжевый цвет; интенсивность окраски р-ра пропорциональна концентрации ниацина в анализируемом образце и может быть измерена фотометрически.

Ход определения

1. Гемолиз и осаждение: к 5 мл крови добавляют 35 мл дистиллированной воды, встряхивают, помещают на 1 час в лед или холодильник при —10°, затем осторожно нагревают до получения однородной жидкости и оставляют на 1 час при комнатной температуре, после чего добавляют 10 мл 5% р-ра сульфата алюминия, встряхивают, оставляют стоять 30 мин., добавляют 1 г карбоната кальция в порошке, встряхивают, комки размельчают стеклянной палочкой, затем кипятят до тех пор, пока пена, вызванная выделением углекислого газа, не доходит до горлышка колбы; фильтруют, точно замеряют объем фильтрата.

2. Гидролиз и нейтрализация: фильтрат помещают в фарфоровую чашку и выпаривают на кипящей водяной бане до объема 10 мл, фильтруют, к фильтрату добавляют 10 мл концентрированной соляной к-ты и кипятят в течение двух часов; после охлаждения жидкость переносят в мерную колбу на 25 мл, добавляют 1—2 капли бромтимолового синего (0,04% спиртовой р-р) и нейтрализуют 20% р-ром едкого натра до зеленоватого цвета, что соответствует значению pH 6,8, затем добавляют 1,5 мл фосфатного буферного р-ра pH 6,8 и доливают бидистиллированной водой до метки, после чего р-р фильтруют.

3. Реакция Кенига: в три пробирки (опытная, холостая и стандартная пробы) помещают по 5 мл нейтрализованного р-ра. В третью пробирку добавляют 0,2 мл (10 мкг) разбавленного стандартного р-ра никотиновой к-ты (для его приготовления растворяют 100 мг никотиновой к-ты в 100 мл дистиллированной воды, перед употреблением разводят до концентрации 50 мкг/мл), в две другие пробирки добавляют по 0,2 мл дистиллированной воды; все три пробирки погружают в водяную баню при 80° на несколько минут, затем в первую и третью пробирки добавляют по 1 мл цианистого брома, приготовленного непосредственно перед употреблением добавлением к бромистой воде (насыщенный р-р) 10% р-ра цианистого калия по каплям до обесцвечивания, во 2-ю пробирку добавляют 1 мл дистиллированной воды; все три пробирки погружают на 2 мин. в водяную баню при 80°, охлаждают под струей воды и оставляют на 15 мин. в темноте; в каждую пробирку добавляют по 0,5 мл смеси, состоящей из 3 мл 10% р-ра n-аминофенилсульфонамида в 6 % соляной к-те и 2 мл 50% соляной к-ты. Коло-риметрируют на фотоэлектроколориметре при 470 нм.

Расчет содержания ниацина в исследуемом образце проводят по формуле:

[(Е_оп — Е_х)/(Е_ст - Е_оп)]*10 (мкг)

где Е_оп — экстинкция опытной пробы; Е_х — экстинкция холостой пробы, Е_ст — экстинкция стандартной пробы; 10 — содержание никотиновой к-ты в стандартной пробе.

Содержание ниацина в цельной крови, определенное с помощью Р.— К. м., составляет в норме 0,6—0,8 мг/100 мл.

См. также Биохимические методы исследования.

Библиография: Джорджеску П. и Пэунеску Е. Биохимические методы диагноза и исследования, пер. с румын., с. 356, Бухарест, 1963; Raoul Y. Dosage de l’azote s^rique n’appartenant ni aux proteides complexes ni aux composes azotes de bas poids moleculaire, Bull. Soc. Chim. biol. (Paris), t. 19, p. 1361, 1937.

Л. М. Пименова.