ЛЕФФЛЕРА МЕТОДЫ

Леффлера методы (Дифтерия, этиология), способ окраски дифтерийных бактерий и окраска жгутиков у бактерий.

Метод окраски жгутиков по Леффлеру

Культура бактерий выращивается на питательном агаре в течение 12—18 час. при оптимальной температуре. В чистую пробирку помещают 1,5 мл дистиллированной или водопроводной воды. Платиновой петлей берут небольшое количество исследуемой культуры бактерий и несколько раз погружают ее в воду до получения равномерной взвеси. Взвесь ставят в термостат на 10— 20 мин. На чистое, прокаленное предметное стекло, платиновой петлей наносят несколько капель взвеси культуры бактерий и высушивают их на воздухе, а затем быстро фиксируют, проводя через пламя горелки не более 2—3 раз. Фиксированный препарат погружают на 0,5—2 мин. в протраву следующего состава: 20% водный р-р танина — 100 мл; насыщенный на холоду р-р сернокислого железа — 50 мл; насыщенный спиртовой р-р фуксина — 10 мл. Обработку в протраве ведут при слабом подогреве. После протравы препарат тщательно промывают водой и высушивают, а затем окрашивают анилиновым фуксином Эрлиха в течение 2—3 мин. Окрашенный препарат промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Модификация метода Леффлера по М. А. Пешкову. Препараты готовят на чистых покровных стеклах. Для окраски необходима протрава из трех р-ров.

1. Насыщенный спиртовой р-р основного фуксина: к 1—2 крупным кристаллам фуксина добавляют 10 мл 96% этилового спирта и ставят в термостат на 1 — 2 часа или на водяную баню при t ° 50°.

2. Водный 20% р-р танина.

3. Насыщенный на холоду р-р соли Мора (сернокислое закисное аммиачное железо). Смешивают 1 мл р-ра 1 и 10 мл р-ра 2; к смеси прибавляют 5,5 мл р-ра 3; на фиксированный препарат с избытком наливают профильтрованный р-р протравы и оставляют его на стекле на 10—15 мин., следя за тем, чтобы жидкость не подсыхала и не подтекала под нижнюю поверхность стекла.

Препарат промывают сильной струей дистиллированной воды (30 сек.). Тонкой тряпочкой удаляют с краев стекла остатки протравы и повторно промывают дистиллированной водой. Обработанный препарат мазком вниз помещают в часовое стекло и подливают профильтрованный фуксин Циля, разбавленный в два раза водой. Окраску производят в течение 3—5 мин., после чего препарат промывают водой.

Библиогр.: Руководство по микробиологической диагностике инфекционных болезней, под ред. К. И. Матвеева, с. 34, М., 1973; Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования, под ред. М. О. Биргера, с. 28, М., 1973. См. также библиогр, к ст. Леффлер Ф.

Д. М. Гольдфарб.