ФОЛИНА МЕТОДЫ

ФОЛИНА МЕТОДЫ (К. О. Folin, шведский физиолог и химик, 1867— 1934) — методы количественного определения в крови общего содержания аминокислот, концентрации мочевой кислоты и глюкозы; имеют большое клинико-диагностическое значение.

Фолина метод определения общего содержаниия аминокислот в крови

Метод предложен в 1922 г.

Принцип метода: аминокислоты (см.) с бета-нафтохинон-сульфокислым натрием образуют окрашенное соединение, интенсивность окраски р-ра пропорциональна содержанию аминокислот и может быть измерена колориметрически (см. Колориметрия) .

Ход определения. Для осаждения белков 1 мл плазмы крови смешивают с 7 мл дистиллированной воды, 1 мл 10% р-ра вольфрамата натрия и 1 мл 2/3 н. р-ра серной к-ты. Встряхивают, затем фильтруют или центрифугируют. Одновременно готовят стандартную пробу: к 1 мл стандартного р-ра глицина (37,5 мг глицина и 0,14 г бензоата натрия растворяют в 100 мл 1 н. р-ра соляной к-ты; 1 мл стандартного р-ра содержит 0,07 мг азота) прибавляют 3 мл дистиллированной воды и 1 мл 2,5% углекислого натрия. К 5 мл фильтрата (опытная проба, соответствующая 0,5 мл плазмы крови) и к стандартной пробе добавляют по 1 капле 1 % р-ра фенолфталеина; опытную пробу титруют до появления розовой окраски 2,5% р-ром углекислого натрия (3—5 капель). Затем к опытной и стандартной пробам добавляют по 1 мл свежеприготовленного (не раньше чем за 1 день до употребления) 0,5% р-ра бета-нафтохинон-сульфокислого натрия. Слегка встряхивают и оставляют обе пробирки на 19 — 30 час. в темноте. Затем в обе пробирки добавляют по 1 мл р-ра ацетоуксусной к-ты (к 100 мл 50% р-ра уксусной к-ты добавляют 100 мл 5% р-ра ацетата натрия), по 1 мл 4% р-ра тиосульфата натрия и по 7 мл дистиллированной воды. Встряхивают, колориметрируют при длине волны 470 нм против холостой пробы, содержащей смесь реактивов.

Расчет содержания аминокислотного азота (мг/100 мл) делают по формуле:

(Е_оп*0,07*200)/Е_ст

где Е_оп — экстинкция опытной пробы, Е_ст — экстинкция стандартной пробы, 0,07 — концентрация азота в стандартном растворе (мг/мл), 200 — коэффициент пересчета на 100 мл сыворотки крови.

Аминокислотный азот в норме составляет примерно 25% от всей фракции остаточного (небелкового) азота в крови (см. Азот остаточный).

Повышение содержания аминокислотного азота наблюдают при экссудативном диатезе, спазмофилии, болезнях печени, фенилкетонурии, заболеваниях, сопровождающихся лихорадкой, опухолях и др.

Фолина метод определения мочевой кислоты в крови

Метод предложен в 1922 г.

Принцип метода: мочевая кислота (см.) в щелочной среде восстанавливает фосфорно-вольфрамовую к-ту с образованием соединения, окрашенного в синий цвет; интенсивность окраски р-ра пропорциональна концентрации мочевой к-ты и может быть измерена колориметрически.

Ход определения. Для осаждения белков к 4 мл сыворотки или плазмы крови добавляют 4 мл 10% р-ра вольфрамата натрия, 28 мл дистиллированной воды и 4 мл 2/3 н. р-ра серной к-ты. Встряхивают, через несколько минут фильтруют. В мерную колбу (25 мл) помещают 20 мл фильтрата, соответствующих 2 мл сыворотки крови, 1,5 мл 40% р-ра углекислого натрия и 0,5 мл фосфорно-вольфрамового реактива (10 мл 10% р-ра вольфрамата натрия, 80 мл 85% р-ра фосфорной к-ты и 750 мл дистиллированной воды), смешивают, кипятят не менее 2 час. с обратным холодильником, после охлаждения доливают водой до 1 л, доводят до 25 мл дистиллированной водой. Одновременно готовят стандартную пробу. Для приготовления основного стандартного р-ра растворяют 0,2 г мочевой к-ты, 2 г двунатриевого фосфата и 1 г мононатриевого фосфата в 600 мл теплой дистиллированной воды (60°), после охлаждения доводят водой до 1 л. Рабочий р-р готовят разведением основного р-ра в соотношении 1:2, 1 мл содержит 0,1 мг мочевой к-ты. К 1 мл рабочего стандартного р-ра добавляют 1,5 мл 40% р-ра углекислого натрия и 0,5 мл- фосфорно-вольфрамового реактива, доводят до 25 мл дистиллированной водой. Через 10 мин. колориметрируют обе пробы против холостой, содержащей смесь реактивов.

Расчет содержания мочевой к-ты (мг/100 мл) делают по формуле:

(Е_оп*0,1*50)/Е_ст

где Еоп — экстинкция опытной пробы, Ест — экстинкция стандартной пробы, 0,1 — содержание мочевой к-ты в стандартной пробе (мг), 50 — коэффициент для пересчета содержания мочевой к-ты на 100 мл сыворотки крови.

За 2—3 дня до анализа больной должен соблюдать молочно-растительную диету.

Содержание мочевой к-ты в крови, определенное с помощью Ф. м., в норме составляет 2—5 жг/100 мл. Повышение концентрации мочевой к-ты в крови наблюдают при нарушениях обмена пуриновых оснований, нек-рых заболеваниях почек (нефрит, нефрозы, туберкулез почек), при декомпенсации сердечной недостаточности, отравлении свинцом, нек-рых болезнях крови и др.

Фолина — By метод определения глюкозы в крови

Фолина — By метод определения глюкозы в крови (H. Wu, китайский биохимик, 1893—1959). Метод предложен в 1919 г.

Принцип метода: глюкоза (см.) при нагревании в щелочной среде восстанавливает тартрат меди в окись меди, к-рая, в свою очередь, восстанавливает фосфорно-молибденово-вольфрамовую к-ту с образованием молибденового синего, интенсивность окраски р-ра пропорциональна количеству глюкозы и может быть измерена колориметрически.

Ход определения. Для осаждения белков к 1 мл крови, взятой с антикоагулянтом (фторид натрия), приливают 7 мл дистиллированной воды, 1 мл 2/3 н. р-ра серной к-ты, 1 мл 10% р-ра вольфрамата натрия, встряхивают и через 15 мин. фильтруют. К 2 мл фильтрата, соответствующим 0,2 мл крови, в мерной колбе (25 мл) добавляют 2 мл медно-натриевого реактива Фолина — By (40 г безводного углекислого натрия растворяют в 400 мл бидистиллированной воды, добавляют 5 г винной к-ты и 4,5 г кристаллического сульфата меди, растворенного в 50 мл воды, доводят водой до 1 л). Колбу помещают в горячую водяную баню, через 6 мин. охлаждают, затем быстро добавляют 2 мл фосфорно-молибденово-вольфрамового реактива (35 г молибденовой к-ты, 5 г вольфрамата натрия, 200 мл 10% р-ра едкого натра и 200 мл бидистиллированной воды кипятят в течение 1 часа, охлаждают^, добавляют 125 мл 85% р-ра фосфорной к-ты, доводят до 500 мл), доливают водой до 25 мл, смешивают. Одновременно готовят стандартную пробу. Для приготовления основного стандартного р-ра растворяют 1 г безводной глюкозы в 100 мл 0,25% р-ра бензойной к-ты; 1 мл основного стандартного р-ра содержит 10 мг глюкозы. Рабочий р-р готовят разведением основного р-ра в 100 раз; 1 мл рабочего стандартного р-ра содержит 0,1 мг глюкозы. Для приготовления стандартной пробы 2 мл рабочего стандартного р-ра обрабатывают так же, как опытную пробу. Обе пробы колориметрируют против холостой, содержащей смесь реактивов.

Расчет содержания глюкозы в крови (мг/100 мл) делают по формуле;

(Еоп • 0,2 • 500)/Ест

где Еоп — экстинкция опытной пробы, Ест — экстинкция стандартной пробы, 0,2 — содержание глюкозы в стандартной пробе (мг), 500 — коэффициент для пересчета на 100 мл крови.

Содержание глюкозы в крови при определении этим методом в норме составляет 70—110 мг/100 мл. Однако в клинике все большее место занимает определение глюкозы глюкозо-оксидазным методом — более специфичным и точным (см. Городецкого методы).

Определение концентрации глюкозы в крови имеет важное диагностическое значение, особенно при сахарном диабете. Гипогликемия (см.) может иметь место при нек-рых инф. болезнях, гипотиреозе, аддисоновой болезни, отравлениях фосфором, бензолом и др.

См. также Кровь, методы лабораторного исследования.

Библиогр.: Джорджеску П. и Пэунеску Б. Биохимические методы диагноза и исследования, пер. с румын., Бухарест, 1963; F о 1 i и О. A system of blood analysis, J. biol. Chem., v. 38, p. 81, 1919, v. 51, p. 377, v. 54, p. 153, 1922.

Л. М. Пименова.