ФАРМЕРА-АБТ МЕТОД

ФАРМЕРА-АБТ МЕТОД (С. J. Farmer, A. F. Abt) — количественный метод определения концентрации аскорбиновой кислоты — витамина С — в плазме крови с целью установления обеспеченности организма этим витамином. Метод применяют в клинико-диагностических исследованиях, однако более информативным считается определение содержания аскорбиновой кислоты в клетках, например, в лейкоцитах (см. Бессея методы). Фармера-Абт метод предложен в 1936 году.

Принцип метода

Фармера-Абт метод основан на сильной редуцирующей способности аскорбиновой кислоты: используют окислительно-восстановительную реакцию между аскорбиновой кислотой и 2,6-дихлорфенолиндофенолом в кислой среде. Количество 2,6-дихлорфенолиндофенола, содержащееся в 1 мл его 0,001 н. раствора, соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты.

Ход определения

К 0,5 мл плазмы крови, взятой с цитратом или оксалатом натрия в качестве антикоагулянтов, добавляют 0,5 мл бидистиллированной воды и 1 мл свежеприготовленного 5% раствора метафосфорной кислоты (см. Фосфорные кислоты) для осаждения белка. Центрифугируют 5 минут при 3 000 об/мин; в две фарфоровые титрационные кюветы (две параллельные пробы) переносят по 0,5 мл надосадочной жидкости и титруют 0,001—0,0005 н. раствором натриевой соли 2,6-дихлорфенолиндофенола до появления стойкого розового окрашивания. Параллельно ставят холостую пробу, содержащую 5% раствор метафосфорной кислоты и бидистиллированную воду в соотношении 1 : 1 вместо плазмы крови. Количество плазмы можно увеличить или уменьшить (до 0,1 мл), соответственно увеличив или уменьшив количество реактивов. Если используются меньшие количества (0,1 мл плазмы крови), для титрования необходимо применять специальные горизонтальные микробюретки емкостью 0,1 мл. Титр раствора 2,6-дихлорфенол индофенола меняется со временем, поэтому перед титрованием необходимо определять поправку к титру по 0,01 н. раствору аммонийной двойной соли железа (соль Мора), титр которого, в свою очередь, устанавливают по титрованному раствору перманганата калия (0,01 н.).

Расчет концентрации аскорбиновой кислоты (мг, 100 мл) производят по формуле: (V, — V2)-K-100-4-0,088, V3

где У t и "V о — количество 0,001 н. раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, пошедшее на титрование опытной и холостой пробы соответственно; V, — количество плазмы крови, взятой для титрования; К — поправка к титру раствора; 4 — разведение плазмы; 0,088 — коэффициент для выражения количества аскорбиновой кислоты в v мг; 100 — коэффициент для расчета количества аскорбиновой кислоты, содержащегося в 100 мл.

В норме содержание аскорбиновой кислоты в плазме крови, определяемое Фармера—Абт метод, колеблется от 0,7 до 1,2 мг/100 мл.

См. также Кровь, биохимия.

Библиогр.: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 472, М., 1969; Farmer С. J. a. A b t A. F. Determination of reduced ascorbic acid in small amounts of blood, Proc. Soc. exp. Biol. (N. Y.), v. 34, p. 146, 1936

Л. М. Пименова