РАМОН-И-КАХАЛЯ МЕТОДЫ

РАМОН-И-КАХАЛЯ МЕТОДЫ (S. Ramon у Cajal, испанский гистолог, 1852 — 1934) — гистологические методы выявления структур нервной ткани путем обработки препаратов солями тяжелых металлов (импрегнации), предложенные С. Рамон-и-Кахалем. Среди этих методов различают модификацию метода Гольджи, направленную на выявление нейроцитов, метод выявления нейрофибрилл и методы импрегнации нейроглии.

Модификация метода Гольджи, разработана в 1888 г. Обработанные по методу Гольджи (см. Гольджи метод) кусочки ткани снова погружают в уже бывшие в употреблении жидкости — сначала в р-р, содержащий бихромат калия и осмиевую к-ту, затем в р-р азотнокислого серебра.

Метод выявления нейрофибрилл, предложенный в 1903 г., основан на восстановлении серебра в импрегнированиой нервной ткани. С. Рамон-и-Кахалем предложено несколько модификаций этого метода применительно к разным объектам. Для выявления нейроцитов коры головного мозга и зерновидных нейроцитов (клеток-зерен) мозжечка свежие кусочки ткани выдерживают в 0,75—3% р-ре азотнокислого серебра при 1° 35° в течение 3—5 дней до появления табачно-коричневой окраски, после этого их промывают в дистиллированной воде в течение 1 мин. и переносят на 24 часа в жидкость, содержащую 1 — 2 г пирогалловой к-ты или гидрохинона, 5 мл нейтрального формалина и 100 мл дистиллированной воды, снова промывают и заключают в целлоидин или парафин.

Методы импрегнации нейроглии

1. Импрегнация золотом с сулемой предложена в 1926 г. Кусочки ткани фиксируют в бром-формоле (15 мл нейтрального формалина, 85 мл дистиллированной воды и 2 г бромистого аммония) в течение 2—20 дней, замороженные срезы переносят в фиксирующую жидкость, ополаскивают в воде и помещают на 4—8 час. при 7° 18—22° в свежеприготовленный р-р, содержащий 0,5—0,8 г сулемы в 50 мл дистиллированной воды. В этот р-р добавляют 6 мл 1% р-ра химически чистого хлорного золота. Затем срезы хорошо промывают и фиксируют 6—10 мин. в 5% р-ре гипосульфита натрия или в фиксаторе Рамон-и-Кахаля (70 мл 5% р-ра гипосульфита натрия, 30 мл 96% спирта и 5 мл концентрированного р-ра бисульфита натрия), обмывают в 50% спирте, переносят на предметное стекло, обсушивают фильтровальной бумагой, наносят абсолютный спирт, затем оригановое масло, ксилол, бальзам. Клетки нейроглии окрашиваются в пурпурно-красный цвет.

2. Импрегнацию серебром с бром-формолом, предложенную в 1924 г., применяют для изучения глиоцитов и их отростков. Этот метод позволяет также выявить базофильное вещество (тельца Ниссля) в нейроцитах. Кусочки ткани фиксируют бром-формолом, как в предыдущем методе, замороженные срезы помещают в усилитель (70 мл дистиллированной воды, 30 мл нейтрального формалина и 3 г бромистого аммония), промывают дистиллированной водой и погружают на 5—10 мин. в смесь, содержащую 10 мл аммиачного серебра, 10—12 мл дистиллированной воды и 7— 10 капель пиридина. Затем смесь подогревают до приобретения срезами табачной окраски, промывают 2 раза в дистиллированной воде, восстанавливают в 5% нейтральном формалине в течение 2—3 мин., золотят в 0,2% р-ре хлорного золота, фиксируют в 5% р-ре гипосульфита натрия, промывают, обсушивают, обезвоживают спиртом и ксилолом и заключают в бальзам.

3. Метод импрегнации ураном с формолом, предложенный в 1912 г., используют для окрашивания гранул протеина и капель жира в глиоцитах. Этот же метод с укороченным временем фиксации применяют для выявления комплекса Гольджи.

См. также Серебрения методы.

Библиография: Ромейс Б. Микроскопическая техника, пер. с нем., М., 1954; R а-тбп у С a j а 1 S. Sobre un sencillo procéder de impregnaciön de las fibrillas interiores del protoplasma nervioso, Arch, lat. med. biol., Madrid, v. 1, p. «3, 1903; он же, Elementos de técnica microgrâfica de] sistema nervioso, Madrid, 1933.

В. С. Сперанский.