МИКРОФОТОГРАФИЯ
Описание
Микрофотография — фотографическая съемка микроскопических объектов, выполняемая с помощью микроскопа или специальных микрофотографических устройств.
Микрофотография применяется в целях документации и демонстрации результатов, полученных с помощью микроскопа (см.) и контролируется по матовому стеклу фотоаппарата.
Для М. малоформатным фотоаппаратом с невывинчивающимся объективом его следует установить на бесконечность и полностью открыть диафрагму. После фокусировки видимого в микроскопе изображения к его окуляру подводят объектив фотоаппарата и производят съемку. В связи с тем, что лучи света, проходящие через окуляр, близки к параллельным, сфокусированный на бесконечность объектив фотоаппарата обладает достаточной глубиной резкости. Увеличение при этом виде съемки определяется: fV = Vo6 * Vок * (f/250) , где V — общее увеличение, Vоб — увеличение объектива, Vок — увеличение окуляра, указанное на его оправе, f — фокусное расстояние объектива фотоаппарата (мм).
Микрофотография при небольших увеличениях иногда производят с использованием только объектива микроскопа, к-рый выполняет в этом случае роль объектива фотоаппарата. Увеличение при этом подсчитывается по формуле V = К/f', где К — расстояние от центра объектива до фотослоя (мм), f' — фокусное расстояние объектива микроскопа (мм).
Наиболее широкое распространение получила М. с помощью микрофотонасадок. Для М. применяются насадочные окулярные фотокамеры для пластинок (МФН-1) и для пленки (МФН-3 и МФН-11). Насадочную фотокамеру устанавливают на микроскоп и жестко соединяют с ним (рис.). В таком микрофотографическом устройстве проекционная система находится в специальном тубусе, к к-рому крепится насадка с визирной трубкой. В корпусе насадки установлена светоотделительная призма, направляющая часть падающего света в окуляр визира, а часть — на плоскость изображения, так что в окуляр визирной трубки видно то же изображение, что и в окуляре микроскопа. Насадочная фотокамера может постоянно находиться в рабочем положении на сменном тубусе микроскопа. Увеличение изображения объекта определяют по формуле:
V = Vo6 * Vок * (K/250)
где К — расстояние от окуляра до фотослоя (мм).
В практике широко применяют стационарные микрофотографические установки (МБИ-6, МБИ-12 и МБИ-15), состоящие из микроскопа, фотоаппарата и осветительной системы. Эти установки постоянно готовы к М., их осветительная аппаратура съюстирована относительно микроскопа, а сам микроскоп съюстирован относительно фотокамеры. Встроенный экспонометр и совмещение наблюдаемой картины с плоскостью изображения в фотокамере создают для М. максимальные удобства. В микроскопах МБИ-12, МБИ-15 фотосъемку производят на фотопленку с размерами кадра 24 X 36 мм или пластинки размерами 9 X 12 см.
Хорошее качество микрофотографий удается получить с помощью апохроматических объективов, специальных фотографических окуляров и окуляров типа гомаль. При М. с малыми и средними увеличениями целесообразно использовать ахроматические объективы, окуляры Гюйгенса и компенсационные окуляры. Наиболее эффективны в М. план-объективы с ахроматической и апохроматической коррекцией, т. к. с их помощью изображение плоских предметов оказывается равномерным на большем протяжении.
В зависимости от окраски снимаемого объекта при М. применяют светофильтры, устанавливаемые . между осветителем и микроскопом, устраняющие остаточный хроматизм объективов и создающие условия для хорошего воспроизведения деталей объекта. Для выявления деталей интенсивно окрашенного объекта применяют светофильтры, окраска к-рых близка к окраске объекта; при М. бледноокрашенных препаратов используют светофильтр, дополняющий окраску препарата. При работе с ахроматическими объективами не следует применять синие и красные светофильтры; апохроматические объективы позволяют использовать весь набор светофильтров.
Освещение при Микрофотографии должно быть интенсивным и равномерным по всему полю зрения микроскопа. Световые лучи концентрируются оптической системой микроскопа на небольшой площади кадра малоформатного фотоаппарата, поэтому изображение имеет достаточную яркость даже при малой мощности источника света, напр, обычного осветителя для микроскопа типа ОИ-7 или ОИ-19. При М. на малом увеличении освещенность поля можно повысить за счет снятия верхней (фронтальной) линзы конденсора микроскопа или замены конденсора фотообъективом с фокусным расстоянием 50 мм и относительным отверстием 1:2. Увеличить контрастность и резкость изображения можно путем диафрагмирования конденсора под визуальным контролем через окуляр микроскопа.
Выдержка при М. зависит от увеличения, плотности и окраски препарата, чувствительности пленки, применяемого светофильтра, конденсора и др. Определение выдержки можно производить путем предварительного экспонирования ряда кадров с изменяющейся выдержкой, а также с помощью специальных экспонометров, напр. ЭФЭН-1. Большие преимущества имеет М. с различными экспозиционными устройствами, напр, с экспозиционным автоматом mf-matic производства ГДР. Основной блок такого аппарата содержит специальный электромагнитный затвор, управляемый с помощью коммутационного аппарата и позволяющий автоматизировать сложный процесс выбора экспозиции.
Для черно-белой М. обычно используют фотопленку МЗ-2, обладающую большой разрешающей способностью и повышенной контрастностью, а также фотопленки «Фото-32», КН-1, к-рые чувствительны ко всем лучам видимого спектра и допускают применение различных светофильтров. При М. бледноокрашенных или бесцветных микроскопических препаратов рекомендуется применять контрастную фотопленку типа «Микрат»; хорошие результаты также дает использование специальных фотопластинок («Для научных целей», «Микро»).
При цветной М. большое значение имеет установление соответствия спектрального состава источника освещения особенностям воспроизведения цвета на фотопленке. Настройку режима освещения с этой целью можно проводить по так наз. серой шкале, к-рую изготавливают путем засвечивания черно-белой матовой фотобумаги с таким расчетом, чтобы получить на ней различные оттенки серого и черного цвета. Образцы приготовленной таким образом фотобумаги наклеивают на картон в виде круга и переснимают на позитивную фотопленку. Полученную тест-шкалу диам. 6 — 8 мм устанавливают на предметном стекле в поле зрения микроскопа и переснимают ее на цветную пленку с различными комбинациями светофильтров. Рациональный режим освещения соответствует кадру, на к-ром шкала имеет нейтрально-серый цвет. Для цветной М. применяют апохроматические объективы, фотоокуляры или окуляры типа гомаль. Цветную Микрофотографию без светофильтров производят на негативную фотопленку ЛН-3; возможно использование фотопленки типа ДС-3 с применением пурпурного и голубого коррекционных светофильтров, обратимой пленки типа ЦО и др.
См. также Фотография в медицине.
Библиография: Сабо Д. Цветная медицинская микрофотография, пер. с венгер., Будапешт, 1967; Федин Л. А. и Барский И. А. Микрофотография, Л., 1971, библиогр.; Шаер Е. Г. Применение фотографии в медицине, М., 1974, библиогр.; Bergner J. u. a. Praktische Mikrofotografie, Lpz., 1973, Bibliogr.; Lawson D. Photomicrography, L., 1972.
H. К. Пермяков, Г. М. Могилевский.