КИНГА МЕТОД

КИНГА МЕТОД (E. J. King, канадский биохимик, род. в 1901 г.) — количественный амилокластический метод определения активности альфа-амилазы (КФ 3.2.1.1) в сыворотке и плазме крови, основанный на способности крахмала, не расщепленного под действием фермента в течение определенного времени, в присутствии ионов йода окрашиваться в сине-фиолетовый цвет. Предложен в 1947 г. Активность амилазы в сыворотке крови увеличивается при остром панкреатите или при обострении хрон, панкреатита. Активность амилазы определяется по времени, необходимому для расщепления крахмала, введенного в реакционную смесь. Для анализа используют свежую сыворотку или плазму крови.

Реактивы

Основной р-р йода (0,1 н.). Рабочий р-р йода готовят непосредственно перед опытом, разводя основной р-р в 20 раз. Р-р крахмала 0,075%; хранят -его в холодильнике не более 5—7 дней.

Ход определения

В пробирку наливают 2 мл р-ра крахмала и ставят в водяную баню при 37°, через 2 мин. в пробирку вносят 0,5 мл плазмы или сыворотки крови, перемешивают и отмечают время начала реакции. Каждые 2—5 мин. отбирают небольшие пробы по 0,1—0,2 мл и выливают их в пробирки, содержащие по 0,2 мл рабочего р-ра йода. Конец реакции отмечают по исчезновению сине-фиолетового окрашивания и появлению желтого окрашивания. В этот момент гидролиз 1,5 мг крахмала, содержащегося в 2 мл взятого р-ра крахмала, считают закончившимся.

За единицу активности фермента принимают его количество, катализирующее гидролиз 1,5 мг крахмала в течение 8 мин. (единица Кинга).

Расчет проводят по формуле:

[активность амилазы, выраженная в единицах на 100 мл сыворотки крови,] = (8 • 100)/ T • 0,5 = 1600T,

где 0,5 — количество сыворотки (или плазмы) крови, введенное в реакционную смесь, T — время реакции в минутах, 8 — время в мин., необходимое для расщепления 1,5 мг крахмала ферментом, содержащимся в 0,5 мл плазмы, активность амилазы в к-рой равна 1 ед. Кинга.

У здорового человека активность амилазы, определенной данным методом, составляют 90—163 ед. Кинга на 100 мл сыворотки крови.

Недостатком К. м. является трудность установления точного времени окончания ферментативной реакции, а также необходимость повторной постановки цветной реакции с йодом. См. также Амилазы.

Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 131, М., 1969; King E. J. Mic-го-analysis in medical biochemistry, p. 61, L., 1947.

Л. H. Делекторская.