КАМЕРЫ СЧЁТНЫЕ
Описание
КАМЕРЫ СЧЁТНЫЕ — приборы для подсчета форменных элементов крови, мочи и цереброспинальной жидкости, а также микроорганизмов. Предложена К. с. франц. физиологом Малассе (L. Ch. Malassez) в 1874 г.
К. с. представляют собой толстое предметное стекло с углублением, на дне к-рого выгравирована счетная сетка; над углублением накладывают шлифованное покровное стекло. Постоянная высота К. с. обеспечивается плотным притиранием покровного и предметного стекол до образования радужных ньютоновых колец (полосы интерференции).
Структурными элементами всех типов сеток являются большие и малые квадраты. Сетки различных типов — Тома, Бюркера, Предтеченского, Тюрка, Нейбауэра, Горяева, Фукса — Розенталя и др.— отличаются различным группированием больших и малых квадратов.
Известные величины — высота камеры, площадь сетки и ее делений и разведение взятой для исследования крови — позволяют высчитать количество форменных элементов в определенном объеме (1 мкл) крови (или другой среды).
Различают открытые и закрытые К. с. В закрытой камере покровное стекло притирают после ее заполнения, и при этом в нее могут попасть пузырьки воздуха. Такие К. с. (Тома — Цейсса с сеткой Тома, Дунгера с особой сеткой) неудобны в работе и не используются.
Открытые камеры (рис. 1) заполняются после притирания покровного стекла. Они имеют две сетки на одном предметном стекле. Пластинки с выгравированными сетками отграничены желобками одна от другой, а также от остальной части предметного стекла. Наличие желобков дает возможность регулировать заполнение камер. Некоторые камеры снабжены металлическими зажимами, фиксирующими покровное стекло.
Открытые К. с. впервые описал С. П. Алферов в 1883 г., затем в 1905 г. Бюркер (К. Burker). Известны открытые счетные камеры Ключарева, Гауссера и Леви, Гельбера, Глауберманна. В СССР широко применяются счетные камеры Горяева и Фукса — Розенталя. Камера Горяева с сеткой Горяева (рис. 2) имеет объем 0,9 мкл, площадь сетки 9 мм2. Сетка состоит из 225 больших квадратов; из них 100 — пустые, 25 — разделены каждый на 16 малых квадратов, 100 — разделены полосами.
Счетная камера Фукса — Розенталя с сеткой Фукса — Розенталя (рис. 3) имеет объем 3,2 мкл, площадь сетки 16 мм2, она состоит из 256 больших квадратов (квадраты, разделенные полосами, не считают).
Методика работы
Перед работой предметное стекло К. с. и шлифованное покровное стекло моют под струей водопроводной воды и насухо вытирают. Затем плотно притирают покровное стекло к камере (до появления радужных ньютоновых колец, ибо только при этом условии объем К. с. постоянен).
Содержимое пробирки перед заполнением камеры несколько раз перемешивают, затем оплавленным концом стеклянной палочки отбирают из пробирки, наклоняя ее, каплю крови и наносят на предметное стекло у самого края покровного стекла. Если одной капли крови недостаточно для полного заполнения К. с., добавляют еще каплю. Если кровь взята в смеситель, то первые капли из капилляра смесителя выпускают, а К. с. заполняют каплей из ампулы смесителя. Остатки жидкости с предметного стекла удаляют марлевым тампоном. Подсчет начинают через 3 мин. после заполнения камеры (за это время происходит оседание форменных элементов крови) под микроскопом при малом увеличении (объектив X 8, окуляр X 10 или X 15) и затемненном поле зрения (с прикрытой диафрагмой или при несколько опущенном конденсоре). Счету подлежат клетки, лежащие внутри квадрата (рис. 4). Клетки, пересеченные сторонами квадратов, считают следующим образом: если более половины клетки находится внутри квадрата, то ее считают, если вне — ее не считают. Клетки, пересекаемые линиями точно посередине, считают на двух смежных, правой и верхней, линиях квадратов и не считают на двух других. При использовании соответствующих разводящих р-ров эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, эозинофилы, базофилы и ретикулоциты могут быть подсчитаны в камере Горяева.
Эритроциты считают в 80 малых квадратах, т. е. в 5 больших квадратах, расположенных по диагонали. Расчет проводится по формуле:
X = a*4000*200/80,
где а — количество эритроцитов, подсчитанное в 80 малых квадратах, 80 — количество сосчитанных малых квадратов, 200 — степень разведения крови, 4000 — множитель для получения содержания эритроцитов в 1 мкл крови (объем малого квадрата 1/4000 мкл). Практически количество эритроцитов, подсчитанное в 5 больших квадратах, умножают на 10 000.
Лейкоциты подсчитывают в 1600 малых квадратах (в 100 больших квадратах). Расчет проводится по формуле:
X = a * 4000 * 20 /1600,
где а — количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, 1600 — количество сосчитанных малых квадратов, 20 — степень разведения крови, 4000 — множитель для получения содержания лейкоцитов в 1 мкл крови. Практически количество лейкоцитов, подсчитанное в 1600 малых квадратах, умножают на 50.
Тромбоциты подсчитывают в 400 малых квадратах (25 больших квадратах по диагонали сетки). Реактивами для разведения могут быть изотонический р-р хлорида натрия, различные р-ры, консервирующие тромбоциты и гемолизирующие эритроциты.
Считают тромбоциты под обычным микроскопом и с помощью фазово-контрастного устройства (см. Фазово-контрастная микроскопия) для более четкого выявления их. После разведения пробирку с кровью оставляют на 25—30 мин. для гемолиза эритроцитов. Затем содержимое пробирки повторно перемешивают и заполняют К. с., к-рую помещают на 5 мин. во влажную камеру (напр., чашки Петри с влажной ватой) для оседания тромбоцитов. Расчет проводят по формуле:
X = a*4000*200/400,
где а — количество тромбоцитов,, подсчитанное в 400 малых квадратах, 200 — степень разведения крови, 400 — число сосчитанных малых квадратов, 4000 — множитель для получения содержания тромбоцитов в 1 мкл крови. Практически количество тромбоцитов, подсчитанное в 400 малых квадратах, умножают на 2000.
Количество базофилов и эозинофилов подсчитывают в камере Горяева в 1600 малых квадратах, как и лейкоциты. Практически подсчитанное количество базофилов и эозинофилов умножают на 50.
Ретикулоциты подсчитывают в камере Горяева в 80 малых квадратах, как эритроциты. Практически подсчитанное количество ретикулоцитов умножают на 10 000.
Определение общего количества клеток в цереброспинальной жидкости (см.) лучше производить в камере Фукса — Розенталя (из-за небольшого числа лейкоцитов в цереброспинальной жидкости). Подсчитывают по всей сетке (256 больших квадратов) под малым увеличением микроскопа (окуляр X 15, объектив х 8).
При очень большом количестве клеток допускается подсчет половины сетки (с последующим умножением результата на 2). Расчет проводят по формуле:
X = a*11/3,2*10,
где а — количество клеток, подсчитанное в 256 квадратах, 11/10— степень разведения, 3,2— объем камеры в мкл. Практически при подсчете в камере Фукса — Розенталя число лейкоцитов делят на 3.
В камере Горяева клетки цереброспинальной жидкости считают не менее 3 раз (также всю площадь), каждый раз заполняя камеру заново, затем берут среднее арифметическое. Расчет проводят по формуле:
X = a*11/0,9*10,
где а — среднее арифметическое количество клеток, подсчитанное по всей сетке, 11/10 — степень разведения, 0,9 — объем камеры в мкл. Практически число подсчитанных лейкоцитов умножают на 1,2.
Количественное определение форменных элементов в моче проводит в камерах Фукса — Розенталя, Горяева: подсчет эритроцитов и лейкоцитов при среднем увеличении микроскопа, подсчет цилиндров — при малом. Степень разведения мочи зависит от метода исследования (см. Моча).
Подсчет в К. с. не вполне точен. Ошибка метода составляет от 10 до 20% в зависимости от количества подсчитываемых элементов.
Уход и условия хранения
Следует предохранять камеры от загрязнения и попадания пыли на сетку. После работы камеру и покровное стекло моют под струей водопроводной воды и осторожно, но тщательно вытирают чистой салфеткой (можно марлевой). Затем завертывают в бумагу и убирают в коробку.
См. также Кровь.
Библиография: Справочник по клиническим лабораторным методам исследования, под ред. Е. А. Кост, с. 22, М., 1975.
Д. Н. Ишмухаметов