ИНДИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ

ИНДИКАЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ (лат. indicatio, от indicare указывать, определять) — комплекс микробиологических методов исследования для определения в объектах окружающей среды (воздух, вода, почва, поверхности различных предметов и др.) патогенных для людей и животных грибков, бактерий, риккетсий, вирусов.

Развитие И. м. как раздела микробиологии связано с выяснением значения воды, воздуха, почвы как факторов передачи заразного начала. Значение И. м. в системе мероприятий по изучению биосферы возросло в связи с ускоренным ростом городов, скученностью населения и связанным с этим загрязнением почвы, воды сточными водами и человеческими экскрементами. Во второй половине 19 в. начинают появляться данные о присутствии патогенных микробов в объектах окружающей среды. Р. Кох и Л. Пастер обнаруживают в почве возбудителей анаэробной инфекции, Николайер (A. Nicolaier) — столбняка. Л. Пастер, а затем и другие ученые проводят исследование воздуха на наличие в нем микроорганизмов. В России появляются работы ученых и врачей, в которых освещаются вопросы влияния загрязненного воздуха на заболеваемость в тюрьмах, внутрибольничных заражений. В этот период предлагаются оригинальные методы улавливания бактериальных аэрозолей. К. Флюгге (1898), а затем П. Н. Лащенков (1927) выдвигают концепцию о роли воздушно-капельного механизма при передаче заразного начала.

Т.к. методы прямого обнаружения патогенных микробов в окружающей среде не всегда давали надежные результаты, возникла необходимость разработки косвенных показателей загрязнения воды, почвы, воздуха.

При И. м. используют средства и методы исследований, которые применяются для лабораторной диагностики инфекционных заболеваний и сан.-микробиол, исследований.

Патогенная микрофлора сконцентрирована в выделениях больного (фекальные массы, мокрота и т. д.). Попадание выделений в воду, почву, воздух ведет к уменьшению концентрации патогенных микроорганизмов в объекте. К микрофлоре выделений присоединяются сапрофиты. Это затрудняет И. м. в объектах окружающей среды.

Эффективность И. м. в значительной степени зависит от правильного отбора проб из объектов окружающей среды, их подготовки к микробиол. исследованию и методов исследования.

Отбор проб из объектов окружающей среды проводят с помощью приборов — бактериоуловителей Дьяконова, Кротова, Речменского и др. (см. батометров (см.) и др. При этом особое внимание обращается на выбор места возможного наибольшего загрязнения объектов патогенной микрофлорой.

Подготовка проб к исследованию преследует цель повысить вероятность обнаружения в исследуемом материале соответствующих микроорганизмов. Микрофлору воды концентрируют. Для этой цели применяют физ. методы, в частности фильтрацию через свечи Беркефельда, Шамберлана или, чаще всего, через нитроцеллюлозные мембранные фильтры (см. Бактериальные фильтры); физ.-хим. способы — осаждение коагулянтами, агглютинирующими сыворотками, метод флотации, а также комбинацию перечисленных способов.

Концентрация вирусов в исследуемой воде осуществляется одновременно с отбором проб, для чего в исследуемую воду на 2 — 4 сут. погружают марлевые тампоны — «подушечки». По другому способу пробы воды переносят в плоскодонные колбы, на дно которых опускают магнит. Под пробку колбы подвешивают на нитке марлевый тампон так, чтобы он полностью был погружен в жидкость. Колбы помещают на электромагнитные мешалки или в аппарат для встряхивания и их содержимое перемешивают 30—45 мин. для адсорбции и концентрации вирусов на тампонах. В дальнейшем тампоны отжимают в стерильном сосуде, полученную жидкость для лучшей десорбции вирусов подщелачивают стерильным р-ром соды или двузамещенным фосфорнокислым натрием с pH 8,0. Затем тампон повторно погружают в эту жидкость и снова отжимают.

Подготовка проб почвы к исследованию начинается с разбавления микрофлоры, т. е. приготовления суспензии в разведении 1:2, 1:3. Для облегчения десорбции вирусов с частичек почвы последнюю подщелачивают. Для последующей концентрации микрофлоры в суспензиях почвы используют методы, применяемые при исследовании воды. С поверхностей различных предметов микрофлору смывают стерильными тампонами, смоченными изотоническим р-ром хлорида натрия, а затем десорбируют и концентрируют упомянутыми способами.

Полученный концентрат микрофлоры, кроме патогенных микробов, содержит большое количество сапрофитов, активно растущих на питательных средах и оказывающих антагонистическое влияние на патогенные микроорганизмы. Для подавления сапрофитов суспензии обрабатываются смесью антибиотиков. Микробные взвеси, предназначенные для исследования на наличие несовершенных патогенных грибков, смешивают с равным количеством р-ра биомицина, пенициллина или стрептомицина (по 500—1000 ЕД на 1 мл взвеси) и выдерживают 30—60 мин. в термостате. Часть пробы, предназначенной для индикации риккетсий и вирусов (за исключением исследования на орнитозы), обрабатывают смесью пенициллина (1000 ЕД на 1 мл) и стрептомицина (1000 ЕД на 1 мл). Материал, предназначенный для исследования на спорообразующую микрофлору, освобождают от вегетативных микроорганизмов прогреванием микробной суспензии при t° 50—60° в течение 30 мин.

Микробиологическое исследование подготовленного объекта начинается с его посева на ингибиторные питательные среды (см.). Для подавления роста сапрофитов к средам добавляют генцианвиолет, антибиотики и другие препараты. Очистка суспензий от посторонней микрофлоры может достигаться предварительным заражением животных втиранием исследуемого материала в скарифицированную кожу животного или погружением выбритого участка кожи в исследуемую воду на несколько часов. Биол, способ очистки применим лишь для индикации микробов зоонозной группы. Этот метод часто используют при индикации риккетсий, возбудителей лептоспирозов, туляремии, сибирской язвы и др.

Засеянные питательные среды, в т. ч. культуры тканей и куриные эмбрионы, инкубируют в термостате. Выделение чистой культуры и идентификацию микроорганизмов проводят по общепринятым бактериологическим методикам (см.).

Для своевременного проведения противоэпид, мероприятий большое значение имеет время, затрачиваемое на проведение И. м. Поэтому при И. м., кроме классических, широко применяют ускоренные и экспрессные методы индикации.

Классические микробиол, методы исследования рассчитаны на получение ответа через несколько суток и даже недель. Согласно этим методам посевы в течение суток выращиваются на питательных средах. Затем изучаются колонии, морфология и тинкториальные свойства микроорганизмов, выделяется чистая культура возбудителя, проводится детальное исследование культуральных, биохим., серол, и патогенных свойств выделенного штамма.

Ускоренные методы позволяют значительно сократить время исследования. Это достигается, во-первых, внесением в питательные среды стимуляторов роста микробов (дрожжевых экстрактов, гидролизатов казеина, фильтрата культуры сарцин, картофельной палочки и др.); во-вторых, исследованием культур после сокращенного срока подращивания (4—6 час.), т. е. до достижения ими стационарной фазы роста; в-третьих, за счет сокращения числа этапов исследований. Такими методами являются реакция нарастания титра фага, ускорение получения результатов ферментации сахаров путем внесения в среды большого количества микробов при сравнительно малом количестве сахара и др.

Реакция нарастания титра фага является оригинальной методикой, позволяющей проводить И. м. без выделения чистой культуры (см. Реакция нарастания титра фагов). Суть методики сводится к выявлению увеличения количества фаговых частиц при их встрече с гомологичными бактериями.

Экспрессные методы И. м. позволяют определить зараженность объекта в более сжатые сроки по сравнению с ускоренными методами. Сокращение времени достигается исключением из схемы исследования процесса выращивания культур и определения их биохим, активности. Вместе с концентрацией микрофлоры в исследуемом объекте экспрессные методы И. м. занимают несколько часов или десятков минут. К этим методам относятся реакции иммунофлюоресценции (см.).

Реакция гаптохолевой флоккуляции принадлежит к числу серологических реакций. В ее основу положен принцип специфической агломерации холестерина, адсорбировавшего на своей поверхности гаптен искомого микроорганизма (полисахаридно-холестериновый комплекс). Реакция состоит из трех этапов: приготовления р-ра холестерина, приготовления гаптохолевого антигена и агломерации гаптохолевого антигена иммунной сывороткой.

Реакция агломерации ализариновых антител базируется на адсорбции специфических антител ализариновой суспензией с последующим скучиванием ее, наступающим в результате сенсибилизации ализариновых суспензионных антител гомологичными микроорганизмами, находящимися в исследуемом материале.

См. также Индикация средств поражения.

Библиография: Адамов А. К. Метод быстрого обнаружения патогенных микробов посредством ализариновых суспензионных антител, Рига, 1959; Артёмова В.Н. Исследования возможности индикации бактерий в воде спектро-ультрамикроскопическим методом, Гиг. и сан., № 9, с. 75, 1972; Багдасарьян Г.А. и Ловцевич Е. Л. Индикация и инактивация кишечных вирусов в объектах внешней среды, М., 1972, библиогр.; Григорьева Л. В. Энтеровирусы во внешней среде, М., 1968, библиогр.; Грин Х. и Лейн В. Аэрозоли — пыли, дымы и туманы, пер. с англ., Л., 1972; Зуев В. Е. Лазер — метеоролог, Л., 1974, библиогр.; Каральник Б. В. Эритроцитарные диагностикумы, М., 1976; Карпузиди К. С. и Дрожевкина М. С. Применение сред с лизатами микробов-кормилок с целью ускорения бактериологической диагностики брюшного тифа, Журн, микр., эпид, и иммун., № 6, с. 92, 1957; Кучеренко В. Д. Индикация патогенных микробов во внешней среде, М., 1964, библиогр.; Методические указания по выделению ци-топатогенных энтеровирусов из сточных вод, сост. В. А. Казанцева и Г. А. Багдасарьян, М., 1965; Скворцов В. В., Киктенко В.С. и Кучеренко В.Д. Выживаемость и индикация патогенных микробов во внешней среде, М., 1966, библиогр.; Tимаков В. Д. и Гольдфарб Д. М. Реакция нарастания титра фага (РНФ), М., 1962, библиогр.; Фихман Б. А. Микробиологическая рефрактометрия, М., 1967, библиогр.

В. Д. Кучеренко.