ЕНДРАШИКА-КЛЕГХОРНА-ГРОФА МЕТОД

ЕНДРАШИКА-КЛЕГХОРНА-ГРОФА МЕТОД (L. Jendrassik, R.A. Cleghorn, P. Grof) — количественный фотометрический метод определения прямого и непрямого билирубина в сыворотке крови.

Принцип метода заключается в том, что при взаимодействии сульфаниловой к-ты с азотистокислым натрием образуется диазофенилсульфоновая к-та (см. Диазореакция), к-рая с билирубином-глюкуронидом (см. билирубина (см.).

При добавлении к сыворотке крови кофеинового реактива несвязанный (непрямой) билирубин превращается в растворимый (прямой) и определяется количественно с диазореактивом. По интенсивности окрашивания определяют концентрацию в сыворотке крови общего билирубина, а по разности между общим и связанным (прямым) билирубином определяют количество несвязанного билирубина.

Реактивы. 1. Кофеиновый реактив: 5 г чистого кофеина, 7,5 г бензоата натрия, 12,5 г уксуснокислого натрия (CH₃COONa•ЗН₂O) растворяют в 90 мл дист, воды, нагревают до 50—60°, перемешивают, охлаждают и доводят дист, водой до 100 мл. 2. Изотонический р-р хлорида натрия. 3. Диазосмесь, приготовленная непосредственно перед работой и состоящая из 10 мл диазореактива I и 0,3 мл диазореактива II. Диазореактив I: 1,5 г сульфаниловой к-ты растворяют при нагревании в 300—400 мл дист, воды, добавляют 15 мл конц. соляной к-ты с уд. весом 1,19; после полного растворения сульфаниловой к-ты и охлаждения р-ра его доливают дист, водой до 1 л. Хранят в темной склянке. Диазореактив II: 0,5% р-р азотистокислого натрия (NaNO₂). Хранят в темной склянке не более 2—3 нед.

Ход определения: в 3 пробирки (общий и прямой билирубин — 1-я и 2-я пробирки и контроль — 3-я пробирка) наливают по 0,5 мл разведенной в 2 раза сыворотки крови; в 1-ю и 3-ю пробирки добавляют по 1,75 мл кофеинового реактива, во 2-ю и 3-ю пробирки добавляют соответственно 1,75 и 0,25 мл изотонического р-ра хлорида натрия и затем в 1-ю и 2-ю пробирки добавляют диазосмесь по 0,25 мл.

Для определения прямого билирубина колориметрирование проводят при 536 нм через 5—10 мин. после добавления диазосмеси; для определения общего билирубина пробы колориметрируют через 20 мин. против воды. Используют кюветы 0,5 см шириной. Расчет производят по калибровочной кривой.

В норме в сыворотке крови человека содержится 0,5—1,2 мг% общего билирубина, 75% его приходится на долю непрямого билирубина.

Е.— К.— Г. м. принят в качестве унифицированного клин, лабораторного метода.

Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 383, М., 1969; Джорджеску П. и Пэунеску Е. Биохимические методы диагноза и исследования, пер. с румын., с. 163, Бухарест, 1963; Jendrassik L. u. С leghorn R. A. Photometrische Bilirubinbestim-mung, Biochem. Z., Bd 289, S. 1, 1936, Bibliogr.; Jendrassik L. u. Crof P. Vereinfachte photometrische Methoden zur Bestimmung des Blutbilirubins, ibid., Bd 297, S. 81, 1938.

B. А. Попков.