БРАНСА МЕТОД

Бранса метод (F. Bruns, немецкий биохимик) — определение активности альдолазы (фруктозодифосфатальдолазы, К.Ф.4.1.2.13) в сыворотке крови. Метод предложен в 1954 г.

В основу метода положена способность альдолазы расщеплять фруктозу-1,6-дифосфат (ФДФ) на фосфотриозы — фосфоглицериновый альдегид и фосфодиоксиацетон. После отщепления лабильного фосфора свободные триозы, взаимодействуя с 2,4-динитрофенилгидразином, образуют соответствующие гидразоны (гидразон глицеринового альдегида и гидразон диоксиацетона), которые окрашиваются в щелочной среде. Интенсивность окраски пропорциональна активности альдолазы и определяется колориметрически.

Повышение активности альдолазы в сыворотке крови наблюдается у больных инфекционным гепатитом, инфарктом миокарда, раком простаты, печени и другими заболеваниями. Наиболее резкие изменения активности альдолазы отмечены при инфекционном гепатите (нередко можно диагностировать заболевание в инкубационном периоде, а также безжелтушные и стертые формы болезни). При остром инфаркте миокарда определение активности альдолазы в сыворотке крови является менее чувствительным тестом, чем определение активности глютамино-щавелевоуксусной трансаминазы или лактатдегидрогеназы (их активность возрастает в большей степени). Поэтому исследование активности альдолазы целесообразно сочетать с определениями активности других ферментов.

Техника определения (в модификации В. И. Товарницкого и Ε. Н. Валуйской, 1955). В данной модификации произведена замена коллидинового буфера раствором двууглекислого натрия. Результаты анализа выражаются в условных единицах оптической плотности, что не требует построения калибровочного графика.

0,5 мл исследуемой сыворотки крови смешивают с 0,5 мл 0,5% раствора двууглекислого натрия, 0,12 мл 0,56 М раствора гидразинсульфата, 0,12 мл 0,002 М раствора монойодуксусной к-ты, 0,12 мл дистиллированной воды и 0,12 мл 0,06 М раствора натриевой соли 1,6-фруктозодифосфата. Смесь инкубируют при t°37° в течение часа. По окончании инкубации белки осаждают прибавлением 1,5 мл 10% раствора трихлоруксусной к-ты и после перемешивания центрифугируют (или фильтруют). К 0,5 мл надосадочной жидкости прибавляют 0,5 мл 3% раствора едкого натра, выдерживают 10 мин. при комнатной температуре, затем к содержимому добавляют 0,5 мл 0,1% раствора 2,4-динитрофенилгидразина, приготовленного на 2 н. растворе соляной к-ты. Смесь нагревают 10 мин. на водяной бане при t° 37°, затем охлаждают и к опытному раствору приливают 3,5 мл 3% раствора едкого натра. Через 10—20 мин. интенсивность окраски определяют на фотоколориметре (оптическая плотность D) в кювете с толщиной слоя 0,5 см при длине волны 530— 540 нм.

В качестве контроля используют смесь, приготовленную так же, как описано выше, но ФДФ прибавляют после инкубации всех реактивов и сыворотки непосредственно перед удалением белков. Разность оптических плотностей между опытной пробой (D1) и контрольной (D2) пропорциональна активности фермента. Активность альдолазы можно выражать в условных единицах оптической плотности (D1—D2), умноженных на 100 (при модификации В. И. Товарницкого и Ε. Н. Валуйской), или в количестве микромолей субстрата, расщепленного 1 мл сыворотки при t° 37° за единицу времени — 1 час или 1 мин. (метод Брунса).

В норме, по данным В. И. Товарницкого и Ε. Н. Валуйской, за 1 час при t° 37° 0,5 мл сыворотки расщепляет количество субстрата, соответствующее 3—8 ед. активности альдолазы.

Библиография: Биохимические методы исследования в клинике, под ред. А. А. Покровского, с. 144, М., 1969; Товарницкий В. И. и Валуйская Ε. Н. Ранняя диагностика болезни Боткина (эпидемического гепатита) биохимическим методом, Лаборат. дело, № 6, с. 7, 1955; Bruns F. Bestimmung und Eigenschaften der Serumaldolase, Biochem. Z., Bd 325, S. 156, 1954.

В. Я. Максимов.