БОЙДЕНА РЕАКЦИЯ

БОЙДЕНА РЕАКЦИЯ (S. Boyden) — серологическая реакция, заключающаяся в агглютинации иммунной сывороткой эритроцитов, обработанных таниновой к-той и нагруженных соответствующим антигеном. Предложена в 1951 г. Б. р.— разновидность непрямой, или пассивной, гемагглютинации (см.). В этой реакции эритроциты выступают в качестве носителей антигена и являются индикатором реакции.

Б. р. разработана для постановки непрямой, или пассивной, реакции гемагглютинации с антигенами, имеющими белковую природу. Нативные эритроциты, как правило, белковые вещества не адсорбируют. Поэтому для фиксации белков на поверхности эритроцитов Бойден предложил обрабатывать нативные эритроциты слабым раствором таниновой к-ты. Существуют и другие методы обработки эритроцитов, повышающие их адсорбционную способность, напр, обработка диазотированным бензидином.

Механизм реакции изучен еще недостаточно. Ставицкий и Аркилья (A. Stavitsky, E. Arquilla, 1955) считают, что таниновая к-та изменяет физ.-хим. свойства, а также форму и строение поверхности эритроцитов. По мнению Бойдена, реакция протекает в две фазы: в первой происходит изменение поверхностных свойств эритроцитов в результате адсорбции на них антигена, во второй — образование конгломератов из сенсибилизированных эритроцитов под действием антител.

Б. р. используется в двух модификациях: для обнаружения антител в сыворотке крови больных людей или иммунизированных животных и для обнаружения антигена в различных биологических жидкостях. Благодаря относительной простоте и высокой чувствительности Б. р. находит применение в клинике для диагностики инфекционных заболеваний (чума, сап, дифтерия, туберкулез, трихинеллез), заболеваний крови (тромбопеническая пурпура), аутоиммунных заболеваний почек и печени, а также для решения некоторых вопросов онкологии, аллергологии, иммунологии и т. д.

Для постановки Б. р. пригодны эритроциты человека (группы 0), барана, а также лошади, кролика, курицы, собаки и др. Кровь берут в раствор Альсевера в соотношении 1 : 1,2 и выдерживают до употребления 3—7 дней при t° 4°. Иногда вместо свежих эритроцитов используют эритроциты, предварительно обработанные формалином, преимущество которых в том, что их можно хранить после обработки таниновой к-той и адсорбции антигена.

Для сенсибилизации эритроцитов используют различные растворимые белковые вещества, как правило, в концентрации 0,1 — 10 мг/мл. Для каждого антигена существует своя сенсибилизирующая доза, и ее определяют в предварительных опытах. Корпускулярные антигены для реакции пассивной гемагглютинации непригодны.

Используемые в реакции сыворотки предварительно прогревают при t°56° в течение 30 мин. для инактивации комплемента (см.) и смешивают с эритроцитами (1:1) при комнатной температуре в течение 10 мин. для удаления неспецифических гетероагглютининов.

Б.р. включает следующие три этапа.

1. Обработка эритроцитов таниновой к-той. Из эритроцитов, трижды отмытых изотоническим раствором хлорида натрия, готовят 2,5% взвесь в том же растворе, pH к-рого с помощью фосфатных буферов доводят до 7,2. К этой взвеси прибавляют равный объем раствора таниновой к-ты (1 : 20 000), приготовленного ex tempore. Смесь выдерживают при комнатной температуре 20 мин., после этого эритроциты один раз отмывают изотоническим раствором хлорида натрия с pH = 7,2. Из этих эритроцитов готовят 2,5% взвесь в изотоническом растворе. Обработанные таниновой к-той эритроциты хранят при t°4° и используют в течение 18 час.

2. Фиксация антигена на поверхности эритроцитов, обработанных таниновой к-той. К 1 мл 2,5% взвеси эритроцитов, обработанных таниновой к-той, прибавляют 1 мл белка в изотоническом растворе и 4 мл изотонического раствора хлорида натрия, pH к-рого с помощью фосфатных буферов доведен до 6,4. Смесь выдерживают при комнатной температуре 10 мин. После этого эритроциты однократно отмывают 2 мл нормальной кроличьей сыворотки, разведенной 1 : 100 изотоническим раствором хлорида натрия с pH =7,2 и ресуспендируют в 1 мл той же сыворотки. Бойден использовал нормальную кроличью сыворотку в разведении 1 : 100 для стабилизации сенсибилизированных эритроцитов и назвал ее «средой реакции». Для контроля эритроциты, обработанные таниновой к-той, подвергают тем же манипуляциям в отсутствие антигена.

3. Реакция гемагглютинации. В ряд пробирок (предпочтительно размером 75x10 мм) разливают уменьшающиеся в два, три, четыре, пять и т. д. раз разведения исследуемой сыворотки в объеме 0,5 мл изотонического раствора хлорида натрия или нормальной кроличьей сыворотки, разведенной 1 : 100. К каждому разведению сыворотки микропипеткой емкостью 0,2 мл добавляют по 0,05 мл взвеси эритроцитов, обработанных таниновой к-той и сенсибилизированных антигеном. Опыт сопровождают контролем: к 0,5 мл исследуемой сыворотки добавляют 0,05 мл взвеси эритроцитов, обработанных таниновой к-той (контроль сыворотки); к 0,5 мл нормальной кроличьей сыворотки (1 :100) добавляют 0,05 мл взвеси эритроцитов, обработанных таниновой к-той (контроль эритроцитов). Пробирки выдерживают при комнатной температуре в течение 3—12 час. Результаты оценивают визуально. Реакция считается положительной, если имеется отчетливая агглютинация сенсибилизированных эритроцитов и отсутствует агглютинация эритроцитов, обработанных таниновой к-той без адсорбции антигена.

Б. р. является одной из наиболее чувствительных реакций для определения антител и несколько менее чувствительна для определения антигена. Следует учитывать, что танизированные эритроциты способны адсорбировать из раствора несколько антигенов, в результате чего наблюдаемая реакция в ряде случаев может быть обусловлена не используемым антигеном, а имеющимися в растворе примесями. Поэтому при исследовании смеси антигенов целесообразно использовать вариант Б. р.— реакцию задержки (торможения) пассивной гемагглютинации.

См. такжe Антиген—антитело реакция.

Библиография: Кэбот Е. и Мейер М. Экспериментальная иммунохимия, пер. с англ., с. 126, М., 1968; Ремезов П. И., Голубев Д. Б. и Синицын В. А. Реакция гемагглютинации, JI., 1964; Софронов Б. Н. О механизме и использовании реакции Бойдена, Лабо-рат. дело, № 9, с. 542, 1964; В о у d e η S. V. The adsorption of proteins on erythrocytes treated with tannic acid and subsequent hemagglutination by antiprotein sera, J. exp. Med., v. 93, p. 107, 1951; Marrack J. R. Sensitivity and specificity of methods of detecting antibodies, Brit. med. Bull., v. 19, p. 178, 1963.

А. И. Мурашова.