БЕСТА МЕТОД

БЕСТА МЕТОД (F. Best, 1878—1920, немецкий врач) — выявление гликогена в гистологических срезах тканей, предварительно заключенных в целлоидин или парафин.

В основе метода лежит окраска срезов аммиачным раствором кармина (см.), пропись которого предложена Бестом в 1906 году. Гликоген хорошо растворим в воде и быстро распадается после смерти (гликогенолиз), поэтому как в процессе фиксации материала, так и при последующей обработке срезов лучше избегать применения водных растворов, однако некоторые специалисты опасность использования водных растворов фиксаторов считают преувеличенной. В качестве фиксаторов используют смесь 96% спирта с формалином (3 : 1), жидкость Карнуа (абсолютного спирта 6 частей, хлороформа 3 части, ледяной уксусной кислоты 1 части), смесь 96% спирта с пикриновой кислотой и т. п.

Приготовление реактивов: 1) краситель Беста — 2 г кармина, 1 г карбоната калия и 5 г хлорида калия растворяют в 60 мл дистиллированной воды и кипятят в течение 5 минут, после охлаждения и фильтрации добавляют 20 мл аммиака (основной раствор пригоден в течение 3 месяцев при t° 0—4°); перед употреблением к 15 мл основного раствора добавляют 15 мл аммиака и 12,5 мл метанола (рабочий раствор годен 2—3 недели); 2) раствор Беста — абсолютного спирта 8 частей, метанола 4 части, дистиллированной воды 10 частей.

Окрашивание срезов: срезы проводят по батарее спиртов возрастающей концентрации до абсолютного спирта, затем окрашивают гематоксилином Эрлиха (5 минут), споласкивают в спирте и воде, окрашивают красителем Беста (15—30 минут), дифференцируют в растворе Беста, затем промывают в спирте, ксилоле, заключают в бальзам. В результате окрашивания препарата гликоген становится ярко-красным, ядра клеток — синими. Многие гистохимики считают эту окраску специфичной именно для гликогена, рекомендуя ее использовать при исследовании тканей, богатых мукополисахаридами, мукопротеидами, гликопротеидами, окрашивающимися одинаково с гликогеном при других методиках. Необходима обработка контрольных срезов диастазой. Предполагается, что основным реагентом красителя Беста является карминовая кислота, избирательная способность которой окрашивать гликоген зависит от ряда физических и стереохимических факторов.

Библиография: Виноградов В. В. Углеводные соединения, в кн.: Принципы и методы гистоцитохим. анализа в патол., под ред. А. П. Авцына и др., с. 7, М., 1971, библиогр.; Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия, пер. с англ., М., 1969; Меркулов Г. А. Курс патогистологической техники, Л., 1969; Пирс Э. Гистохимия, пер. с англ., М., 1962; Best F. Uber Karminfarbung des Glykogens und der K eme, Z. wiss. Mikr., Bd 23, S. 319, 1906.

H. K. Пермяков.