БЕНИНЬЕТТИ МЕТОД

БЕНИНЬЕТТИ МЕТОД (Benignetti)— один из методов окраски жгутиков бактерий. За 2—3 дня до применения готовят растворы: I — раствор сернокислого цинка (1 г) и танина (15 г) в дистиллированной воде (100 мл); II — насыщенный в горячем состоянии водный раствор квасцов; III — насыщенный спиртовой раствор генцианвиолета. Перед окраской растворы I, II, III смешивают в пропорции 5:5:3.

Для окраски по Бениньетти используют 18-часовую бактериальную культуру, выращенную при оптимальной температуре.

Препарат для окраски готовят следующим образом: захватив петлей немного бактериальной массы из нижней части посева на косом агаре (но не из конденсационной воды), погружают петлю в пробирку с 5 мл водопроводной воды, пока бактериальная масса не разведется. Каплю суспензии наносят на чистое часовое стекло и прибавляют каплю 2% водного раствора четырехокиси осмия. После осторожного перемешивания смесь покрывают другим часовым стеклом. Чистое покровное стекло, фиксированное пинцетом, медленно проводят 3—4 раза через верхнюю часть пламени горелки. После того как стекло остынет, пастеровской пипеткой на обработанную огнем поверхность последовательно переносят с часового стекла пять капель суспензии: одну в центре, а четыре — по диагоналям, ближе к углам. На поверхности хорошо обезжиренного стекла нанесенные капли расплываются. Когда они высохнут, стекло быстро проводят один раз через пламя (в случае неудачной окраски жгутиков, выявленной при последующей микроскопии, следует попробовать обойтись без этой легкой фиксации).

На фиксированный препарат наливают свежеприготовленную профильтрованную смесь растворов I, II, III, подогревают 2—3 минуты до появления паров, после чего препарат тщательно промывают водой, высушивают, заключают в канадский бальзам и исследуют с иммерсией. См. также Жгутики бактериальные, Окраска микроорганизмов.

М. А. Пешков.