БАХА-ЗУБКОВОЙ МЕТОД

БАХА-ЗУБКОВОЙ МЕТОД — микрометод определения активности каталазы (К. Ф. 1.11.1.6) в крови.

Метод основан на свойстве перекиси водорода разлагаться под влиянием каталазы (см.) на воду и кислород. Неразложившуюся часть перекиси водорода титруют раствором перманганата калия в кислой среде и определяют количество неразрушенной перекиси водорода; в контроле находят общее количество взятой перекиси водорода, предварительно инактивируя каталазу кипячением. Количество разрушенной перекиси водорода определяют по разности значений (за определенный промежуток времени); оно соответствует активности фермента и обозначается каталазным числом. Так как каталаза крови содержится в основном в эритроцитах, каталазное число делят на число эритроцитов в 1 мм3 крови, а полученный результат называют показателем каталазы или каталазным индексом. Каталазный индекс показывает концентрацию каталазы в эритроците, которая может меняться и не параллельно с изменением числа эритроцитов.

У взрослых людей, по данным ряда авторов, каталазная активность крови колеблется в пределах 18—22 ед.

Повышение активности каталазы обнаружено у больных пернициозной анемией и при других макроцитарных анемиях. Ряд веществ — кофеин, теобромин, алкоголь, ацетоновые тела — повышает активность фермента. Снижение активности каталазы, подобно другим ферментам (карбоангидраза, амилаза и др.), отмечается при брюшном тифе, скарлатине, малярии, туберкулезе легких, при хронических отравлениях фосфором, мышьяком, ртутью, свинцом. У больных злокачественными опухолями каталазная активность крови остается неизменной, в то время как уменьшается активность каталазы в печени и в меньшей степени в почках. Существует врожденная гипокаталаземия. Описано редкое наследственное заболевание (болезнь Такахары), характеризующееся отсутствием каталазы в крови и других тканях и обусловленное нарушением синтеза фермента (см. Акаталазия).

Техника определения

В колбу с 20 мл дистиллированной воды вносят 0,02 мл крови (из пальца, обмытого стерильной дистиллированной водой и высушенного ватой, без повышенного трения). Момент разведения крови отмечают по часам. В две из четырех заранее приготовленных колбочки с 7 мл дистиллированной воды вносят по 1 мл полученного раствора крови, в две оставшиеся — по 1 мл прокипяченной (для инактивации фермента) в течение 2 мин. крови. Все четыре колбочки оставляют на 30 мин. (считая с момента разведения) при комнатной температуре, затем в каждую приливают по 2 мл 1% раствора пергидроля и оставляют снова на 30 минут, после чего доливают в каждую колбочку по 5 мл 10% раствора серной кислоты для прекращения действия фермента и титруют 0,1 н. раствором перманганата калия до появления стойкого розового окрашивания.

Расчет

Так как 1 мл 0,1 н. раствора перманганата калия соответствует 1,7 мл 0,1 н. раствора пергидроля, то разность титрований (в опыте и контроле) умножают на 1,7, получая при этом значение каталазного числа, из которого уже вычисляют показатель каталазы. Точность метода — в пределах 3—5%.

Библиогр.: Руководство по клиническим лабораторным исследованиям, под ред. Е. А. Кост и Л. Г. Смирновой, с. 257, М., 1964; Ш а м р а й Е.Ф. и Пащенко А. Е. Клиническая биохимия, с. 19, М., 1970; Bach A. u. Subkowa S. tJber die Fermentzahlendes Blutes, Biochem. Z., Bd 125, S. 283, 1921.

В. Я. Максимов.