Уреагенифлюоскрин диагностик д/выяв антиген ureaplasma urealyticum

ІНСТРУКЦІЯ

для застосування

"УреагеніФлюоСкрин"

Діагностикум для виявлення антигенів Ureaplasma urealyticum

у реакції імунофлюоресценції

Діагностикум "УреагеніФлюоСкрин" являє собою набір для виявлення антигенів Ureaplasma urealyticum у реакції імунофлюоресценції, до якого входять 2 комплекти.

До КОМПЛЕКТУ № 1 входять такі інгредієнти:

• антитіла поліклональні кролячі проти антигенів Ureaplasma urealyticum, мічені ФІТЦ (АТ-ФІТЦ), ліофілізовані - аморфна маса у вигляді таблетки синього кольору, гігроскопічна;
• нормальний кролячий глобулін, мічений ФІТЦ (НКГ-ФІТЦ), ліофілізований -аморфна маса у вигляді порошку або таблетки синього кольору, гігроскопічна;
• розчинник для АТ-ФІТЦ і НКГ-ФІТЦ (ФСБР) - прозора безбарвна рідина; 
• наважка солей для приготування фосфатно-сольового буфера (ФСБ) - кристалічний порошок білого кольору;
• фіксуюча рідина (ФР) - прозора безбарвна рідина;
• предметні стекла.

До КОМПЛЕКТУ №2 входять:

• позитивний контроль (К⁺) - мазок на предметному склі клітин Vero, інфікованих U. urealyticum (8 серотип);
• негативний контроль (К^-) - мазок на предметному склі клітин Vero, не інфікованих U. urealyticum (8 серотип).

Контрольні препарати інактивовані (фіксовані 96° етанолом протягом 15 хв). КОМПЛЕКТ № 2 надається за бажанням споживача.

Набір розрахований на проведення 30 аналізів.

ПРИЗНАЧЕННЯ

Виявлення антигенів U. urealyticum у реакції імунофлюоресценції в мазках, зскрібках, мазках-відбитках із цервікального каналу, уретри та піхви.

ПРИНЦИП МЕТОДУ

АТ-ФІТЦ являють собою поліклональні кролячі антитіла до цитоплазматичних мембран клітин U. urealyticum, мічені ФІТЦ. Принцип дії грунтується на реакції антиген-антитіло. Мічені ФІТЦ антитіла проти уреаплазм специфічно з'єднуються з антигенами U. urealyticum, які знаходяться у фіксованих зразках.

При перегляді препарату в люмінесцентному мікроскопі визначається зелена флюоресценція уреаплазм у вигляді окремих гранул на мембранах клітин.

ЗАБІР МАТЕРІАЛУ ДЛЯ ДОСЛІДЖЕННЯ

Клінічний матеріал із доступних для дослідження слизових оболонок (уретра, цервікс, піхва) одержують за допомогою тампонів (бавовняна вата), ложки Фолькмана та інших інструментів, наносять тонким шаром у лунки чистого знежиреного скла. Препарат підсушують на повітрі й фіксують.

Досліджуваний матеріал повинен містити якнайбільшу кількість епітеліальних клітин.

Примітка: подальшу обробку препарату рекомендується проводити відразу ж після фіксації. При необхідності допускається короткочасне зберігання ( 2-3 дні при температурі 4 °С) або тривале (1 місяць при температурі мінус 70 °С) фіксованих препаратів (без повторного заморожування й відтавання).

ПІДГОТОВКА РЕАГЕНТІВ

1. Ліофілізовані АТ-ФІТЦ розчиняють в 1,5 мл ФСБР ( рН від 7,2 до 7,6) протягом 3-5 хв. Розчин залишають на 5-10 хв у звичайних умовах (реагенти перед використанням повинні мати кімнатну температуру). НКГ-ФІТЦ розчиняють аналогічно. Розчинені АТ-ФІТЦ та НКГ-ФІТЦ використовують протягом 10-12 діб, зберігають при температурі від 4 до 6 °С. При необхідності тривалішого зберігання (до 1 місяця) АТ-ФІТЦ і НКГ-ФІТЦ розливають на дрібні порції й зберігають при температурі мінус 20 °С. Перед використанням реагенти повинні мати кімнатну температуру.

2. Наважку солей (ФСБ) розчиняють протягом 2-5 хв в 2 л дистильованої води при перемішуванні при кімнатній температурі, зберігають при температурі від 4 до 10 °С не більше 7 діб.

ПОСЛІДОВНІСТЬ ПРОВЕДЕННЯ ДОСЛІДЖЕННЯ

1) Нанести досліджуваний матеріал у дві лунки чистого й знежиреного предметного скла. Дати висохнути на повітрі.

2) Зафіксувати матеріал охолодженою ФР (при температурі від 4 до 10°С) протягом 15 хв при кімнатній температурі, підсушити на повітрі.

3) В одну лунку предметного скла нанести автоматичною піпеткою 30 мкл розчинених АТ-ФІТЦ, в іншу лунку - 30 мкл розчиненого НКГ-ФІТЦ. АТ-ФІТЦ і НКГ-ФІТЦ перед використанням повинні мати кімнатну температуру.

4) Інкубувати препарат 15-20 хв у вологій камері при температурі 38 ± 1 °С. Не допускається висихання нанесених АТ-ФІТЦ на препараті.

5) Сполоснути препарат водопровідною водою й промити фосфатно-сольовим буфером (ФСБ) 3 рази по 15 хв для видалення надлишку антитіл. Знову сполоснути водопровідною водою й дати висохнути на повітрі.

6) Досліджувати препарат у люмінесцентному мікроскопі з набором світлофільтрів: ФС 1-2, БС 8-2, СЗС 7-2, ЖС-18 і при збільшенні 600-1000х. При мікроскопії використовувати спеціальне нефлюоресціююче масло. При відсутності останнього можливе використання диметилфталату (х.ч.).

Примітка: ретельне відмивання препарату необхідне для усунення неспецифічного світіння.

ОБЛІК РЕЗУЛЬТАТІВ

При люмінесцентній мікроскопії уреаплазми виявляються у вигляді інтенсивного зеленого гранулярного світіння на мембранах епітеліальних клітин і в міжклітинному просторі.

При відсутності в клінічному матеріалі епітеліальних клітин дослідження рекомендується повторити, щоб розвіяти сумнів у правильності взяття матеріалу.

У мазку, пофарбованому АТ-ФІТЦ, припускається виявлення інтенсивного світіння в ділянці мембран не менш ніж на чотирьох епітеліальних клітинах. При обмеженій кількості епітеліальних клітин у клінічному матеріалі позитивна оцінка припускає виявлення в препараті не менш 10 яскраво-зелених гранул, які чітко виділяються на червонуватому фоні препарату. У мазку другої лунки, пофарбованому НКГ-ФІТЦ, негативний результат виявляється у вигляді відсутності специфічного світіння в ділянці мембран епітеліальних клітин або спостерігається зеленувато-жовтувата аутофлюоресценція базальних мембран епітеліальних клітин.

Примітка: при оцінці препарату звертати увагу на колір флюоресценції. Уреаплазми світяться яскраво-зеленим кольором. Жовта або зеленувато-жовта флюоресценція оцінюється як артефакт. Дуже часто джерелом неспецифічного світіння є наявність у досліджуваному матеріалі великої кількості слизу. Для одержання якісних мазків досліджуваний матеріал помістити в пробірку з 5 мл фізіологічного розчину (ФР), ретельно перемішати й центрифугувати при 1000 об/хв протягом 5-10 хв. Супернатант відкинути, до осаду додати 50 мкл ФР, суспендувати і приготувати мазки в лунках предметного скла.

проведення реакції ІмунофлюоресценцІЇ на контрольнИХ препаратах (К⁺ і к^-), облік результатів.

1. У лунки позитивного і негативного контрольних препаратів внести по 30 мкл розчинених АТ-ФІТЦ.

2. Інкубувати препарати 15-20 хв у вологій камері при температурі 38 ± 1 °С. Не допускати висихання нанесених АТ-ФІТЦ.

3. Сполоснути препарати водопровідною водою й промити 3 рази по 15 хв фосфатно-сольовим буфером. Знову сполоснути препарат водою й висушити на повітрі. Досліджувати препарати в люмінесцентному мікроскопі, як зазначено раніше для досліджуваного матеріалу, використовуючи нефлюоресціююче імерсійне масло.

При правильній постановці реакції в позитивному контрольному препараті в 5-10 полях зору виявляється більше 10 яскраво-зелених гранул, зв'язаних з мембранами червонясто забарвлених клітин і розташованих між клітинами.

У негативному контрольному препараті відсутнє яскраво-зелене світіння гранул. Спостерігаються лише червонясто пофарбовані клітини Vero без специфічного гранулярного світіння.

При одержанні зазначених результатів діагностикум можна використовувати для виявлення U. urealyticum.

ФОРМА ВИПУСКУ

Тест-система включає 2 комплекти:

КОМПЛЕКТ № 1

• АТ-ФІТЦ (антитіла поліклональні кролячі проти антигенів U. urealyticum, мічені ФІТЦ, ліофілізовані) - 0,15 мл - в одному флаконі, місткістю 10 мл,

закупорені гумовими кришечками та завальцовані

алюмінієвими ковпачками -1 фл 

• НКГ-ФІТЦ (нормальний кролячий глобулін, мічений ФІТЦ,

ліофілізований) - 0,15 мл, у тій самій упаковці  - 1 фл

• ФСБР (розчинник ) – 5,0 мл, у тій самій упаковці  - 1 фл
• ФСБ (фосфатно-сольовий буфер), наважка солей – 11 г,

у тій самій упаковці  - 2 фл

• ФР (фіксуюча рідина) – 5,0 мл, у тій самій упаковці  - 1 фл
• Предметні стекла . -7 шт
• Інструкція для застосування - 1 шт.

КОМПЛЕКТ № 2

• К⁺ - позитивний контроль - 1 шт.
• К^- - негативний контроль - 1 шт.
• Інструкція для застосування - 1 шт.

КОМПЛЕКТ № 2 поставляється за бажанням споживача.

Діагностикум "УреагеніФлюоСкрин" випускається у вигляді упакованих в картонні коробки комплектів: КОМПЛЕКТИ №1 і № 2.

КОМПЛЕКТ № 1 розрахований на проведення 30-ти визначень, включаючи контрольні зразки.

УМОВИ ЗБЕРІГАННЯ Й ТРАНСПОРТУВАННЯ

Зберігання. Відповідно до СП 3.3.2.1248-03. 

КОМПЛЕКТ № 1 - при температурі від 4 до 10 °С.

КОМПЛЕКТ № 2 - при температурі мінус 20 °С.

Транспортування. Відповідно до СП 3.3.2.1248-03.

КОМПЛЕКТ № 1 - при температурі від 4 до 25 °С не більше 3 діб. Заморожування не допускається.

КОМПЛЕКТ № 2 - при температурі мінус 20 °С.

ТЕРМІН ПРИДАТНОСТІ

КОМПЛЕКТ № 1 -1,5 року.

КОМПЛЕКТ № 2 - 1 міс.

Рекламації на специфічні й фізичні властивості препарату направляти до Державного науково-дослідного інституту стандартизації й контролю медичних біологічних препаратів ім. Л.А. Тарасевича за адресою: 

119002, м. Москва, Сивцев Вражек, буд. 41,

телефон/факс (495) 241-39-22

та на адресу підприємства-виробника: ТОВ "НІАРМЕДИК ПЛЮС" 125047, 

вул. 4-та Тверська-Ямська, буд. 2/11, корпус 2, тел./факс (495) 741-49-89

Офіційний представник: «ФармТехБізнес»