Хламоноскрин набор диагност д/опред:

ІНСТРУКЦІЯ

для застосування

«ХлаМоноСкрин» 

антитіла діагностичні

флюоресціюючі хламідійні родоспецифічні моноклональні

мишачі сухі

«ХлаМоноСкрин» являє собою антитіла діагностичні флюоресціюючі хламідійні родоспецифічні моноклональні мишачі сухі, специфічні до ліпополісахаридного антигену (ЛПС) хламідій, мічені флюоресцеінізотіоціанатом (ФІТЦ), які виявляють C. trachomatis, С. psittaci та С. рneumoniae. Випускаються у 2 комплектах.

До КОМПЛЕКТУ №1 входять:

• антитіла діагностичні флюоресціюючі хламідійні родоспецифічні моноклональні мишачі сухі (МКАТ-ФІТЦ);
• розчинник для МКАТ-ФІТЦ (ФСБР);
• наважка солей для приготування фосфатно-сольового буфера (ФСБ);
• фіксуюча рідина (ФР), ацетон;
• рідина для монтування препаратів;
• предметні стекла.

До КОМПЛЕКТУ №2 входять: 

• позитивний контроль (К⁺) - предметне скло з лункою діаметром 8 мм, на якій фіксовані елементарні й ретикулярні тільця C. Trachomatis (серотип L2) і клітини перещеплюваної лінії карциномосаркоми МакКой;
• негативний контроль (К^-) - предметне скло з лункою діаметром 8 мм, на якій фіксовані клітини перещеплюваної лінії карциномосаркоми МакКой.

ПРИЗНАЧЕННЯ

Виявлення хламідій у клінічному й експериментальному матеріалі.

ПРИНЦИП МЕТОДУ

Антитіла діагностичні флюоресціюючі хламідійні родоспецифічні моноклональні мишачі сухі (МКАТ-ФІТЦ), специфічні до антигену ЛПС хламідій, у реакції прямої імунофлюоресценції в розведенні 1:5 повинні утворювати з родоспецифічним антигеном хламідій комплекс, який світиться яскраво-зеленим кольором при перегляді в люмінесцентному мікроскопі, у вигляді дрібних крапок або зерен, що відповідають розмірам елементарних (200-450 нм) і ретикулярних (800-1200 нм) тілець хламідій.

Антитіла не утворюють подібний комплекс з антигенами гетерологічних мікроорганізмів.

При люмінесцентній мікроскопії контрольних зразків повинно бути виявлено: 

в К⁺  - не менше 10 яскраво-зелених елементарних і ретикулярних тілець С. trachomatis і не менше 15 епітеліальних клітин перещеплюваної лінії МакКой, забарвлених у червоний колір;

в К^-  - не менш 15 епітеліальних клітин перещеплюваної лінії МакКой, забарвлених у червоний колір.

ПРИГОТУВАННЯ МАТЕРІАЛУ ДЛЯ ДОСЛІДЖЕННЯ

Взяття матеріалу для дослідження.

Клінічний матеріал повинен містити епітеліальні клітини й мінімальну кількість слизу, ексудату й домішок крові.

1. Взяття матеріалу із уретри. Пацієнтові рекомендують не мочитися протягом 1 години до взяття проби. Стерильний ватний тампон вводять в уретру на глибину 3-4 см у чоловіків і 1-1,5 см у жінок. Матеріал збирають обертовим рухом і тампон виймають.

2. Взяття матеріалу із цервікального каналу. Перед взяттям матеріалу попередньо видаляють слизову пробку із отвору цервікального каналу стерильним тампоном. Тампон для взяття матеріалу вводять у цервікальний канал на 1-1,5 см і обертовим рухом (5- 10 с) збирають матеріал. Потім тампон виймають, не доторкаючись до стінок піхви.

Готування мазка.

1. Відразу після взяття матеріал наносять обертовим рухом тампона на поверхню 8 мм лунки чистого знежиреного предметного скла так, щоб всі сторони тампона стикнулися з поверхнею скла. -
2. Мазок висушують на повітрі протягом 30 хв при кімнатній температурі.
3. Мазок фіксують 0,15 мл ацетону, охолодженого до температури 2 - 4 °С до повного його випарювання при кімнатній температурі.

Подальшу обробку мазка рекомендується проводити відразу після його фіксації. Допускається зберігання фіксованих препаратів не більше 3 діб при температурі від 2 до 8 °С і 1-1,5 місяця при температурі -70 °С.

ПІДГОТОВКА РЕАГЕНТІВ

Розчин моноклональних антитіл, мічених ФІТЦ.

Вміст флакона з антитілами розчинити в 1,5 мл (розведення 1:5) розчинника для антитіл протягом 5 хв і ретельно перемішати.

Зберігання: 12-14 діб при температурі від 2 до 8 °С. Перед використанням препарат необхідно довести до кімнатної температури.

Приготування 0,1 М ФСБ.

Вміст флакона з наважкою солей розчинити в 500 мл дистильованої води. Зберігання: 1 місяць при температурі від 2 до 8 °С.

Приготування відмиваючого розчину

До 100 мл 0,1 М ФСБ додати 900 мл дистильованої води.

Зберігання: 5 діб при температурі від 2 до 8 °С. Перед використанням необхідно довести до кімнатної температури.

ПОСЛІДОВНІСТЬ ПРОВЕДЕННЯ ДОСЛІДЖЕННЯ

1. На фіксований мазок наносять 30 мкл розчину хламідійних антитіл, повністю покриваючи 8 мм лунку предметного стекла й поміщають його у вологу камеру при температурі 37±1 °С на 15-20 хв, не допускаючи підсихання нанесеного розчину антитіл.

2. Мазок промивають 3 рази по 10 хв, змінюючи відмиваючий розчин або 2 рази по 5 хв на магнітній мішалці, змінюючи відмиваючий розчин.

3.  Препарат повністю висушують при кімнатній температурі.

4. На пофарбований мазок наносять 5 мкл монтуючої рідини, покривають знежиреним покривним склом і видаляють зайву монтуючу рідину і пухирці повітря, які іноді утворюються, фільтрувальним папером.

5. Мазок досліджують у люмінесцентному мікроскопі (див. інструкцію до мікроскопа) при збільшенні: об’єктив 90 х, окуляри 5 х, коефіцієнт поправки х 1,1 з системою фільтрів, які забезпечують збуджуюче світло з довжиною хвилі не більше 490 нм і емісію з середньою довжиною хвилі 590 нм (наприклад, при роботі на люмінесцентному мікроскопі ЛЮМАМ І-3 використовують комбінацію світлофільтрів ФС 1-4; БС 8-3; СЗС 24-2). При мікроскопії використовують спеціальне нефлюоресціююче (!) імерсійне масло.

ОЦІНКА РЕЗУЛЬТАТІВ

Облік результатів проводиться по 4-хрестовій системі, що оцінює колір і яскравість специфічної флюоресценції, пов'язаної з елементарними й ретикулярними тільцями хламідій при перегляді послідовно не менш 30 полів зору:

" 4 +" - дуже яскрава зелена флюоресценція;

"3 +" - яскрава зелена флюоресценція;

"2 +" - зелена флюоресценція;

"1 +" - тіньова зелена флюоресценція;

" -" - відсутність специфічної флюоресценції. 

Результат вважається позитивним, якщо в мазку реєструють не менше 7 яскраво-зелених (не менш ніж на 2+) світінь у вигляді крапок (для елементарних тілець) хламідій або овалу (для ретикулярних тілець) хламідій, що виділяються на фоні клітин циліндричного епітелію, пофарбованих у червоний колір.

Результат вважається негативним, якщо в мазку відсутнє специфічне світіння при обов'язковій наявності не менш 20 клітин циліндричного епітелію в препараті.

Сумнівною реакція вважається при наявності одиничних (менш 7) тілець хламідій з інтенсивністю забарвлення не менш ніж на 2+ або при відсутності клітин циліндричного епітелію у препараті. У цьому разі рекомендується повторити аналіз. При повторній реакції на 2+ проба вважається негативною.

Облік результатів реакції починають із контролів.

ПРОВЕДЕННЯ РЕАКЦІЇ ІМУНОФЛЮОРЕСЦЕНЦІЇ НА КОНТРОЛЬНИХ ПРЕПАРАТАХ (К⁺ і К^-), ОБЛІК РЕЗУЛЬТАТІВ

У лунки з фіксованими препаратами наносять по 10 мкл антитіл С. Trachomatis у розведенні 1:5. Препарати фарбують, монтують і продивляються у люмінесцентному мікроскопі відповідно до постановки реакції, описаної вище.

У зразку К⁺ повинно бути виявлено не менш 10 яскраво-зелених елементарних і ретикулярних тілець хламідій у полі зору і не менше 15 епітеліальних клітин лінії МакКой, що перещеплюється, пофарбованих у червоний колір. У зразку К ^– у полі зору повинно бути виявлено не менш 15 епітеліальних клітин лінії МакКой, що перещеплюється, пофарбованих у червоний колір і при повній відсутності специфічного світіння. При одержанні інших результатів не можна приступати до дослідження матеріалу від пацієнтів.

Форма випуску

КОМПЛЕКТ №1.

1. Антитіла діагностичні флуоресціюючі хламідійні родоспецифічні моноклональні мишачі сухі (МКАТ-ФІТЦ родоспецифічні) - 0,3 мл у флаконі, закупореному гумовою пробкою і завальцьованому алюмінієвим ковпачком. 1 фл.
2. Розчинник для МКАТ-ФІТЦ (ФСБР) - 1,5 мл у такій самій упаковці. 1фл.

3. Фосфатно-сольовий буфер (ФСБ), наважка солей 5,0 г у такій самій упаковці. 

1 фл. 

4. Фіксуюча рідина (ФР) – 5,0 мл у такій самій упаковці. 1 фл.

5. Рідина для монтування препаратів – 3,0 мл у такій самій упаковці. 1 фл.

6. Предметні стекла 6 шт. 

КОМПЛЕКТ №2.

Контрольні препарати поставляються за бажанням споживача.

1. Позитивний контроль (К⁺) у пакеті із поліетиленової плівки. 1 шт. 

2. Негативний контроль (К^-) у такій самій упаковці. 1 шт.

Контрольні матеріали інактивовані. 

КОМПЛЕКТ №1 і КОМПЛЕКТ №2 упаковують в окремі картонні коробки.

ТЕРМІН ПРИДАТНОСТІ. УМОВИ ЗБЕРІГАННЯ І ТРАНСПОРТУВАННЯ.

Термін придатності: КОМПЛЕКТ №1-1 рік, КОМПЛЕКТ №2 - 6 місяців.

Препарат із закінченим терміном придатності застосуванню не підлягає.

Зберігання відповідно до СП 3.3.1248-03. 

КОМПЛЕКТ № 1 при температурі від 4 до 10 °С.

КОМПЛЕКТ № 2 при температурі мінус 20 °С. Транспортування відповідно до СП 3.3.1248-03. 

КОМПЛЕКТ № 1 при температурі від 4 до 10 °С, допускається короткочасне (протягом 3 діб) транспортування при температурі від 11 до 25 °С.

КОМПЛЕКТ № 2 при температурі мінус 20 °С.

Рекламації направляти на адресу Державного НДІ стандартизації й контролю медичних біологічних препаратів (ДІСК) ім. Л. А. Тарасевича за адресою:

119002, м. Москва, Сивцев Вражек, буд. 41, телефон/факс (495) 241-39-22 та на адресу підприємства-виробника: ТОВ "НІАРМЕДИК ПЛЮС":

125047, вул. 4-та Тверська-Ямська, буд. 2/11, корпус 2, тел./факс (495) 741-49-89

Офіційний представник: «ФармТехБізнес»