БАЗОФИЛЬНЫЙ ТЕСТ
Описание
Базофильный тест (греческий basis основа + philia склонность; синоним тест Шелли) — метод диагностики специфической сенсибилизации организма, основанный на дегрануляции базофилов после добавления к ним специфического аллергена (рис.). Предложен Шелли (W. В. Shelley) в 1962 году. В последующие годы базофильный тест использован различными исследователями для изучения пыльцевой, лекарственной и пищевой аллергии. Базофильный тест получил признание как дополнительный тест для диагностики аллергических заболеваний и как метод выявления аллергических антител человека. Базофильные лейкоциты крови подобно тканевым тучным клеткам принимают участие в освобождении гистамина, гепарина, медленно реагирующей субстанций и серотонина. Считают, что реакция дегрануляции базофилов крови свидетельствует о наличии реакции аллерген — антитело (см. Антитела, аллергические).
Существует две разновидности базофильного теста: 1) прямой тест, при к-ром реакция дегрануляции воспроизводится на спонтанно сенсибилизированных базофилах больного (лейкоциты больного + аллерген); 2) непрямой тест, при котором реакция дегрануляции воспроизводится на базофилах кролика или здорового человека (лейкоциты + исследуемая сыворотка больного + аллерген); в реакции лучше использовать лейкоциты кролика, содержащие много базофилов (4—12%). Непрямой тест получил большее распространение.
Материалы, используемые для прямого базофильного теста: 1) свежая кровь больного; 2) аллерген, повышенную чувствительность к которому предполагается исследовать; 3) фиксирующий раствор (6 мл этанола, 2 мл хлороформа и 2 мл ацетона); 4) целлюлозные мембранные фильтры.
Методика прямого базофильного теста
Смешивают 0,25 мл гепаринизированной крови больного и 0,025 мл аллергена. Через 5 минут к 0,1 мл смеси добавляют охлажденный фиксирующий раствор, который разрушает эритроциты, оставляя интактными лейкоциты. После фиксации в течение ночи при t° 4° лейкоциты ресуспензируют и фильтруют через целлюлозные мембранные фильтры в течение 20 минут. При этом базофилы остаются на фильтрах. Фильтры окрашивают в течение 30 секунд раствором толуидинового синего, обезвоживают в этаноле и просветляют в ксилоле. Подсчитывают 20 базофилов. Их классифицируют по размеру, окраске, числу и локализации базофильных гранул. Для «истощенных» базофилов характерно: 1) небольшое количество гранул; 2) небольшие слабо окрашенные гранулы; 3) значительное количество гранул, расположенных за пределами клетки. Тест считается положительным, если «истощено» (дегранулирует) больше половины базофилов.
Материалы, используемые для непрямого базофильного теста: 1) свежая или сохраняемая при t°—20° сыворотка крови больного; 2) аллерген; 3) концентрированная взвесь лейкоцитов кролика, полученная при центрифугировании гепаринизированной крови со скоростью 3000 об/мин в течение 5 минут в тонких стеклянных пробирках или полиэтиленовых трубочках; 4) предметные стекла, окрашенные раствором нейтральрота. Для каждого аллергена опытным путем подбирают ту концентрацию, которая не вызывает неспецифических изменений базофилов.
Методика непрямого базофильного теста
На окрашенное нейтральротом предметное стекло наносят одинаковое количество (по 0,005 мл) лейкоцитарной взвеси, исследуемой сыворотки больного и аллергена. Предметное стекло накрывают покровным, края которого смазаны вазелином, и ставят на 10 минут в термостат (при 37°). Параллельно ставят контрольные пробы: 1) исследуемая сыворотка со взвесью лейкоцитов (чтобы исключить неспецифическую дегрануляцию); 2) взвесь лейкоцитов с аллергеном. Реакцию наблюдают под микроскопом с иммерсией. Считают не менее 20 базофилов. Основные признаки повреждения базофилов следующие: разбухание и потеря сферичности, гранулолизис, выход гранул из клеток. Полное разрушение клетки с выходом гранул в окружающую среду («взрывчатая» дегрануляция) наблюдается крайне редко.
Выделяют три степени реакции дегрануляции: 1) слабая реакция (+)— дегрануляция при базофильном тесте превышает таковую в контроле на 10%; 2) умеренная реакция (+ +) — превышение дегрануляции в контроле на 15%; 3) резко положительная (+ + +) — превышение дегрануляции в контроле на 20% и более. Критерием положительного базофильного теста можно считать исчезновение гранул более чем у 70% базофилов. Ценность представляют только четко положительные результаты, а отрицательные не исключают состояния повышенной чувствительности к данному аллергену.
См. также Аллергические болезни (диагностика).
Библиогр.: Ишимова Л. М. и 3еличенко Л. И. Аллергические реакции форменных элементов крови и их значение для диагностики, в кн.: Аллергич. заболевания у детей, под ред. М. Я. Студеникина и Т. С. Соколовой, с. 144, М., 1971; Польнер А. А. Реакция дегрануляции базофильных лейкоцитов при аллергии к растительной пыльце, Тер. арх., г. 40, № 2, с. 103, 1968; Shelley W. В. New serologicai test for allergy in man, Nature (Lond.), v. 195, p. 1181, 1962; он жe, Indirect basophil degranulation test for allergy to penicillin and other drugs, J. Amer. med. Ass., v. 184, p. 171, 1963.
С. М. Орлов.